PTD-ΔhNFATminiDBD蛋白在大鼠心脏移植急性排斥模型中的应用研究

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目的:建立一种简洁、有效的大鼠异位心脏移植模型,作为器官移植的实验研究方案。采用大鼠心脏移植急性排斥反应模型研究带蛋白转导结构域的人NFAT最小DNA结合域(protein transduction domain conjugated human NFAT mini DNA binding domain, PTD-△hNFATminiDBD)体内抗移植排斥反应的功能。方法:以Ono法为基础并在此基础上进行改进。受体手术先进行至准备缝合。供体生理盐水冰块腹部降温至双腋部低温后,胸腔打开以冰生理盐水快速致心跳停止。供心采用直视下缝合。建立Wistar-SD大鼠腹部心脏移植急性排斥模型。增殖含△hNFATminiDBD. PTD-△hNFATminiDBD质粒载体的E·Coli M15菌株,诱导△hNFATminiDBD.PTD-△hNFATminiDBD融合蛋白表达并提取、纯化。Wistar和SD大鼠随机配对进行手术,将手术成功的36只大鼠随机分成四组:生理盐水对照组、△hNFATminiDBD蛋白组、PTD-△hNFATminiDBD蛋白组、环孢素组。各组术后第一天分别予以不同剂量的相应药物腹腔注射,每天一次,共一周。观察移植心脏存活时间并进行统计分析,术后第七天各组中随机取1例供心切片HE染色。结果:成功建立了大鼠心脏移植模型,本项研究采用改良Ono于术方法,共制作大鼠心脏异位移植模型41例,成功37例,成功率为90.2%。建立的Wistar-SD大鼠腹部心脏异位移植模型随机分成四组,各组经药物处理后,其供心存活时间分别为:空白对照组:8.63±0.95d、△hNFATminiDBD蛋白组:9.06±1.32d、PTD-△hNFATminiDBD蛋白组:15.06±0.94d、环孢素组:22.94±1.15d。PTD-△hNFATminiDBD蛋白组大鼠移植心脏的存活时间较空白对照组显著延长(P<0.05),但较环孢素组短(P<0.05)。各组动物心脏组织经病理切片后观察结果支持统计分析结果。结论:本实验室采用的改良Ono手术方法,能简化手术步骤、提高手术成功率,特别有利于无心脏移植手术或血管手术经验者进行相关研究。PTD-△hNFATminiDBD融合蛋白能显著延长大鼠异位移植心脏的存活时间。
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