海洋硫酸多糖PS916是以来源于海洋的甲壳质为基础原料,经多步分子修饰而得到的一种硫酸氨基多糖,化学名为β-(1,4)-3-氧-硫酸基-6-氧-硫酸基-6′-氧-羧甲基醚钠盐,英文名为β-(1,4) polyglycosamine-3-O-sulfate-6-O-sulfate-6′-O- carboxylmethyl ether sodium,药效学研究结果表明PS916具有调血脂、抗脂质过氧化、抑制血管平滑肌细胞增殖等作用,具有多途径抗动脉粥样硬化作用,系正在进行系统研究的I类新药。本文对PS916在大鼠体内的药代动力学、组织分布及排泄进行了研究,初步阐明了PS916在大鼠体内的吸收,分布及排泄过程,为新药开发和临床用药提供了一定的理论依据。本论文主要研究工作如下:一、PS916的荧光标记研究PS916为多糖类物质,在分子结构中缺乏发色团和荧光团,不能直接用紫外或荧光法进行检测,质谱法也不适合多糖的定量分析。因此,我们以异硫氰酸荧光素(FITC)为荧光标记试剂,对PS916进行了荧光标记,标记后的PS916的荧光最大激发波长Ex为480nm,最大发射波长Em为515nm;荧光标记的PS916中含FITC 0.74%;以高效凝胶色谱法测定PS916分子量及分子量分布,测定结果表明,标记后的PS916平均分子量及分子量分布宽度与标记前比较均未发生显著变化。二、PS916的体内外稳定性研究以荧光标记的PS916为研究对象,采用高效凝胶色谱法考察PS916在磷酸盐缓冲液(PBS)及大鼠血浆中的稳定性。PS916体外在PBS、大鼠血浆及大鼠尿液中37℃孵育1h、20h,其分子量及分子量分布宽度均未发生变化,荧光强度也未发生变化,表明PS916体外在PBS、大鼠血浆及大鼠尿液中稳定。同时,对大鼠以口服和静脉注射两种给药方式给药后PS916在血浆、尿液和粪便中的稳定性进行了研究,体内大鼠口服PS916后血浆和粪便中PS916均以原型形式存在;PS916静脉注射给药后尿液中以原型形式从尿液中排泄,说明大鼠口服和静脉注射PS916后,主要以原型的形式吸收代谢。三、PS916在生物样品中的定量分析方法研究建立了生物样品中PS916的荧光定量分析方法,PS916的血浆浓度在0.2-20μg/mL的浓度范围内PS916的荧光强度与浓度具有良好的线性关系,线性方程为:y =22.951x– 3.3561,相关系数r2=0.9991,血浆中PS916最低定量限为0.2μg/mL;低、中、高(0.2、2.0、20.0μg/mL) 3种浓度的日内精密度在1.52–7.83%之间,日间精密度在2.14–8.42%之间,组内回收率在84.3-108.0%之间,组间回收率在88.7-100.1%之间;血浆样品稳定性考察显示PS916在-70℃条件下放置4周相对稳定。PS916在组织、尿液及粪便中的线性、精密度、准确度及稳定性分析均符合生物样品体内定量分析的要求。证明本实验方法适用于PS916在大鼠血浆、组织等生物样品中含量的测定。四、PS916在大鼠体内的药代动力学研究1、大鼠口服和静脉给药PS916后,血药浓度-时间曲线数据采用非房室模型计算药代动力学参数,通过Cmax和AUC与给药剂量的相关性分析结果表明,大鼠口服和静脉给药后,PS916在大鼠体内呈线性动力学特征。2、大鼠口服PS916后,三种剂量的平均Tmax为3.28±0.58h,可知PS916在大鼠体内吸收较慢,达峰迟缓。大鼠口服三种剂量下平均消除半衰期t1/2为7.84±0.12h,大鼠静脉注射三种剂量下平均消除半衰期t1/2为8.74±1.01h,口服和静脉给药后的t1/2无统计学差异(P>0.05),PS916在大鼠体内的半衰期较长,3、大鼠口服和静脉给药后,用AUC0-∞计算PS916绝对生物利用度为9.06%,显示大鼠口服PS916吸收较差,生物利用度较低。4、在大鼠连续给药实验中,口服50mg/kg剂量PS916多次给药与单次给药相比,药-时曲线基本吻合,首、末次给药后的t1/2和AUC0-∞值均无统计学差异,提示PS916多次给药体内不易蓄积,且对其代谢酶无诱导抑制作用。5、大鼠单次口服PS916后,组织分布实验表明,给药后1h,药物能分布到大部分组织中,在肠和胃中分布最高,另外主要分布在血流充足的肝和肺组织;给药6h后,肠和胃组织中药物浓度明显下降,肾脏中药物浓度明显升高,表明PS916吸收入血后的药物主要经肾脏随尿液排出;给药24h后,大部分组织中药物浓度均明显降低。给药后脑组织中可检测到药物,说明PS916能透过血脑屏障,向脑内分布。6、大鼠单次静脉给予PS916后,组织分布实验表明,PS916静脉给药后在大鼠各主要组织中广泛分布。给药后1h,PS916在大鼠肾脏、肝脏、血浆中的浓度较高,在肾脏中浓度最高,在肠中亦有相对较高浓度,在肾脏中含量高说明该药物主要经肾排泄。PS916静脉注射6h后,肾脏中药物浓度在3个时间点中最高,在肾脏、肝脏、肠、心、肺、胃、脾等组织中的浓度均大于其血浆浓度,说明PS916的组织分布比例较大。给药后PS916在脑中亦可检出,说明PS916能透过血脑屏障,向脑内分布。7、大鼠口服给予PS916后,主要以原型从粪便和尿液中排出体外,给药72h后,尿中PS916的累积排泄量占给药剂量百分比为1.288±0.958%;粪中PS916的累积排泄量占给药剂量百分比为78.974±5.498%;灌胃给药后72h内,有相当于给药量80.26%的药物以原型的形式随尿粪排出体外,灌胃给药后PS916主要是从粪便中排出。8、大鼠静脉注射给予PS916后,主要以原型从粪便和尿液中排出体外,给药72h后,尿中PS916的累积排泄量占剂量百分比为54.388±11.832%;粪中PS916的累积排泄量占剂量百分比为6.286±1.938%;静脉注射给药后72h内,有相当于给药量60.67%的药物以原型的形式随尿粪排出体外,静脉给药后PS916主要是从尿液中排出体外。