基于核酸探针和分子印迹技术检测肝细胞癌相关microRNA和病毒

来源 :湘潭大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kevil2009
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肝细胞癌(HCC)是一种原发性肝癌,死亡率较高,患者常因为确诊时间晚而错过最佳治疗时间。因此,HCC的预防及早期诊断显得尤为重要。HCC的出现常伴随着micro RNA(miRNA)的失调,因此miRNA的表达水平可为HCC的早期诊断提供参考数据。乙型肝炎病毒(HBV)感染会导致慢性肝炎和肝硬化,进而导致HCC的出现,因此HBV的准确检测有利于对HCC进行预防。光分析方法的灵敏度高,且光学仪器操作简单。因此,本论文基于核酸探针和分子印迹技术设计了三种光分析策略用于miRNA-21和HBV的检测,主要研究内容如下:1.基于氨基化的氧化锌量子点(ZnO-NH2)和羧基修饰的Y形DNA(CO-Y-DNA)构建p H响应的DNA水凝胶用于miRNA-21的比率型检测。p H敏感的ZnO-NH2和CO-Y-DNA分别作为p H响应元件和比率型检测单元。该水凝胶具有紧密堆积的无机-有机杂化物凝聚结构,可保护核酸免受核酸酶攻击,具有良好的抗酶稳定性。除此之外,比率型的设计有利于借助内部参考避免因仪器光源和探针浓度等外在因素带来的干扰,减少假性信号的产生。该方法具有良好的稳定性和特异性,检测限达到83 p M,在实际样品中具有较好的回收率(96.77-104.70%),是一种可用于准确检测核酸及具有核酸适配体的目标物的通用方法。2.基于核酸适配体和DNA发夹构建荧光探针用于HBV的准确检测。本研究选择了HBV个体与HBV DNA作为模型。采用DNA纳米线作为支架,HBV表面抗原的适配体和DNA发夹分别作为病毒个体和HBV DNA的识别元件,标记的荧光染料TAMRA和嵌入型染料硫黄素T作为荧光信号。该方法对HBV个体和HBV DNA的检测具有良好的特异性和较高的灵敏度。HBV个体和HBV DNA的平行检测可定性是否存在HBV感染,这有利于避免隐匿性HBV带来的假阴性信号。相比目前检测HBV的方法,该方法工作量小,时间短。3.基于分子印迹聚合物(MIP)及核酸适配体构建夹心型共振光传感器用于HBV的高特异性双重识别。碳球和二氧化硅分别作为印迹病毒和修饰适配体的基底材料,MIP和适配体作为HBV的特异性识别元件。本研究将夹心策略与共振光散射技术结合,不仅提高了检测的特异性,也实现了信号的增大。MIP和适配体与HBV的特异性结合可分别导致第一重和第二重共振光信号增强。该方法获得了令人满意的选择性和灵敏度,印迹因子高达7.56,检测限达到11 p M。对解决传统分子印迹技术检测大分子病毒时特异性较差的问题具有重要意义。
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