目的:利用ADSCs所具有的促进血管新生的作用，研究其对拟移植皮瓣进行不同方式处理后皮瓣成活率、应用条件及作用机制，建立ADSCs促进皮瓣血管化的方法。方法:1、分离培养人脂肪干细胞：通过胶原酶消化法分离制备人脂肪组织来源干细胞，并进行体外培养，观察其形态特征，并绘制细胞生长曲线及倍增时间，进行流式与分化实验鉴定。建立稳定的ADSCs的分离培养方法。2、ADSCs对BALB/c小鼠背部皮瓣预处理的实验：将40只BALB/c小鼠随机分成5组，每组8只。在小鼠背部设计1cm×4cm随意皮瓣，将ADSCs预先注射到其中的3组拟形成皮瓣的皮下组织中，随后于注射2天（A组）、5天（B组）、7天（C组）后行皮瓣形成术，同时行即刻注射组（D组）及空白对照组（E组）的皮瓣形成术。在术后2周时观察皮瓣的成活情况，并进行病理切片观察和vWF免疫组化染色及VEGF测定，定量分析组织中微血管变化的情况。3、TNF-α培养后的ADSCs对小鼠背部皮瓣预处理的实验研究：选用BALB/c小鼠16只，并随机分成2组，A组为ADSCs与TNF-α共培养预处理组，B组为ADSCs预处理组。将ADSCs与TNF-α共培养24h，预先注射于A组鼠拟形成皮瓣的皮下组织；将ADSCs预先注射于B组鼠拟形成皮瓣的皮下组织。于注射2天后形成皮瓣，在术后2周时观察皮瓣的成活情况，并进行病理切片观察和vWF免疫组化染色及VEGF测定，定量分析组织中微血管变化的情况。结果：1、采用酶消化法分离人ADSCs，大多数细胞呈梭形，胞质丰富。传代后，于倒置显微镜下可见细胞呈梭形似成纤维样细胞形态，大小形态较一致，呈鱼群样或旋涡状排列。流式鉴定显示：阳性表达CD29，CD44，CD73和I类主要组织相容性抗原（HLA-ABC），而不表达CD14，CD31,CD34，CD45和II类主要组织相容性抗原（HLA-DR）。在条件培养基培养后具有向脂肪细胞、成骨细胞分化的能力。2、ADSCs对BALB/c小鼠背部随意皮瓣预处理的结果显示， A组皮瓣成活率为（38.250±6.671），B组皮瓣成活率为（21.000±2.878），C组皮瓣成活率为（30.000±3.891），D组皮瓣成活率为（51.500±6.347），E组皮瓣成活率为（34.500±4.175）。将预处理2天、5天、7天的实验组比较，预处理2天组皮瓣成活率较高（P<=0.01），再将预处理2天组与即刻注射组和空白对照组的结果相比较，即刻注射组皮瓣成活率最高（P<=0.01）。vWF、VEGF检测结果基本与皮瓣成活面积变化趋势保持一致。3、经TNF-α处理后的ADSCs预处理组皮瓣成活率(86.125±5.330)较单纯ADSCs预处理组(39.375±5.370）高（P<=0.01）,有统计学意义。vWF、VEGF检测结果基本与皮瓣成活面积变化趋势保持一致。结论:1、脂肪干细胞来源充足,细胞获得量大,体外增殖能力强,采用胶原酶消化法成功分离、培养ADSCs，经过传代培养获得状态好,形态均一,呈极性排列的ADSCs。经表面分子标记与诱导分化鉴定为具有多向分化能力的多能干细胞；2、预先向正常组织内注射ADSCs后，分别于2天、5天、7天后行皮瓣成型，皮瓣成活率均小于即刻注射ADSCs，皮瓣局部微血管密度较即刻注射ADSCs组低,VEGF浓度与微血管密度变化趋势保持一致，提示其促血管新生的作用未得到预先的发挥，因此推测ADSCs发挥其生物学功能，需要一定的炎性微环境；3、ADSCs经过与炎性因子共培养后再对皮瓣行预处理，皮瓣成活率显著提高，ADSCs促血管生成的作用得到发挥，皮瓣局部微血管密度增高,VEGF浓度高于对照组，提示ADSCs发挥促血管生成作用需要一定的炎性刺激，其所处的微环境对其生物学效应的发挥具有重要的作用。关键词：皮瓣；脂肪干细胞；细胞移