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1目的云南省位于我国西南边疆,地域辽阔,自然条件复杂,垂直气候明显,具有的虫媒传染病宿主和媒介蚊虫种类多、分布广的特点,存在着多种虫媒病毒及其相关性疾病的分布和流行。长期以来云南省是流行性乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE)的主要流行地区,发病率一直较高,同时还存在其它虫媒病毒病的流行。此外,每年夏秋季,云南各地常有病毒性脑炎和不明原因发热病人的流行,给当地医疗和疾控机构在对这类疾病的诊断、预防和控制带来诸多困难。云南省与虫媒病毒病高发的老挝、缅甸和越南等东南亚国家相邻,并与乙脑高发区贵州和四川省相邻,存在传入多种虫媒病毒的可能。随着经济和社会的飞速发展,边境地区将有更多的人员和物资流动,导致境外虫媒病毒病及其它传染病传入并引起暴发流行的可能,成为该地区日益严重的公共卫生问题。因此,研究云南省病毒性脑炎和不明原因发热病例的病毒病因,了解这些疾病的分布和流行情况,具有非常重要的公共卫生意义。由于引起病毒性脑炎和不明原因发热疾病的病原体种类较多,在临床上很难确定是何种病原体所致,给这类疾病的诊断和防治带来诸多困难。为此,本课题对云南省部分地区的病毒性脑炎和不明原因发热病例进行感染和发病状况调查,通过血清学试验,检测病人血清和脑脊液中包括虫媒病毒、肠道病毒和呼吸道病毒中具有代表性的16种病毒的抗体,以期了解病毒性脑炎和不明原因发热病例中相关病毒感染状况、病毒病原因子以及临床和流行病学特征,为云南省病毒性脑炎和不明原因发热病例的监测、诊断和防治提供科学依据。2方法在云南省西双版纳州、德宏州、大理州、保山市和昭通市开展病毒性脑炎和不明原因发热病例的调查,采集相关病人的血清和脑脊液标本,并对每一例病人进行流行病学调查和临床资料的收集,建立病例及其标本背景信息Excel表。应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay, IFA)对病人血清和脑脊液标本进行16种病毒的IgM和IgG抗体的检测。根据病毒抗体检测结果并结合其它资料进行病毒病因和流行病学分析。3结果2006-2008年在上述5州市共调查了747例病毒性脑炎和不明原因发热病例,共采集到血清和脑脊液标本853份,其中血清776份,脑脊液117份。747例病例中共检测出10种病毒IgM抗体阳性,总阳性率为79.5%。IgM抗体阳性的10种病毒为乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、版纳病毒(Banna virus, BAV)、登革病毒(Dengue virus, DENV)、罗斯河病毒(Ross river virus, RRV)、巴马森林病毒(Barmah forest virus, BFV)、单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus, HSV) 1/2、腮腺炎病毒(Mumps virus, MuV)、埃可病毒(Entero cytopathic human orphan virus, ECHOV)、柯萨奇病毒(Coxsackie virus, COXV)和麻疹病毒(Measles virus, MV);其中5种虫媒病毒(JEV、BAV、DENV、RRV和BFV) IgM抗体总阳性率为47.8%(357例),其它5种病毒(HSV、MuV、ECHOV、COXV和MV)抗体总阳性率为32.8%(153例),结果详见表1.1。表1.1云南省2006-2008年病毒性脑炎和不明原因发热病例ELISA法IgM抗体检测结果地区总病虫媒病毒IgM抗体检测常见普通病毒IgM抗体检测例数JEV DENV BAV RRV BFV COXV ECHOV HSV MuV版纳216 73 1 16 4 1 26 34 23 17德宏329 112 48 35 2 0 66 61 18 16大理48 17 1 12 0 0 7 5 3 1保山26 11 0 4 0 0 1 0 1 1昭通128 102 ND ND 0 0 13 13 ND ND合计747 315 50 67 6 1 113 113 45 35注：存在COXV和ECHOV-IgM抗体交叉阳性病例；另有保山市1例麻疹病毒IgM抗体阳性病例未列入表内。上述结果表明,虽然JEV、BAV、HSV、COXV、MuV、ECHOV、DENV、RRV、BFV和MV病毒的IgM抗体阳性率有较大差异,但这10种病毒仍是当地病毒性脑炎和不明原因发热疾病的重要病原。本次调查的747例病毒性脑炎和不明原因发热病例中,病毒性脑炎和不明原因发热病例分别为526例和221例。在病毒性脑炎526例中,血清和脑脊液分别采集到511份和117份,共检测出抗体阳性病例412例(78.3%),分别为JEV-IgM抗体阳性268例,DENV-IgM抗体阳性5例,BAV-IgM阳性39例,RRV-IgM抗体阳性2例,COXV-IgM抗体阳性103例,ECHOV-IgM抗体阳性99例,HSV1/2-IgM抗体阳性16例,MuV-IgM抗体阳性9例,MV-IgM抗体阳性1例,未检查到BFV-IgM抗体阳性病例。表明能引起脑炎的病毒种类较多,除JEV等虫媒病毒外,肠道病毒(COXV和ECHOV)、呼吸道病毒(MuV和MV)和HSV也是脑炎的重要病原。从不明原因发热病例221例中,采集到血清标本225份,共检测出抗体阳性病例182例(82.4%),分别为：JEV-IgM抗体阳性47例,DENV-IgM抗体阳性45例,BAV-IgM阳性28例,RRV-IgM抗体阳性4例,BFV-IgM抗体阳性1例,COXV-IgM抗体阳性100例,ECHOV-IgM抗体阳性4例,HSV1/2-IgM抗体阳性29例,MuV-IgM抗体阳性26例,MV-IgM抗体阳性1例。表明不明原因发热病人中,除存在JEV、DENV BAV、RRV和BFV感染外,还存在肠道病毒(COXV和ECHOV)呼吸道病毒(MuV和MV)和HSVl/2病毒感染病例。病毒性脑炎和不明原因发热病例中不同病毒检测结果详见表1.2。表1.2云南省2006～2008年病毒性脑炎和不明原因发热病例标本中IgM抗体检测结果比较病例总病虫媒病毒IgM抗体检测常见普通病毒IgM抗体检测例数JEV DENV BAV RRV BFV COXV ECHOV HSV MuV病毒性脑炎526 268 5 39 2 0 103 99 16 9不明原因发热221 47 45 28 4 1 10 4 29 26合计747 315 50 67 6 1 113 113 45 35注：另有保山市1例麻疹病毒IgM抗体阳性病例未列入表内。另外在云南省德宏州瑞丽市监测到一起输入性登革热暴发,经实验室检测确诊的45例病人大多为赴缅甸等东南亚国家经商或务工人员,也有缅甸边民到瑞丽就医的病人。还发现2例本地感染病例(瑞丽1例,陇川1例)。本次血清和脑脊液标本中,未检测出辽宁病毒(Liaoning virus, LNV)、Tahyna病毒(Tahyna virus, TAHV)、辛德毕斯病毒(Sindbis virus, SINV)、云南新环状病毒(Yunnan Orbivirus, YNOBV) 65株和93株、东南亚十二节段双链RNA病毒(Seadornavirus, SEADNV)(BAV-6株)的IgM抗体阳性病例。4结论526例病毒性脑炎病例中,检测出4种虫媒病毒IgM抗体阳性314例,总阳性率为59.69%,表明虫媒病毒是当地病毒性脑炎的主要病原。其中JEV-IgM抗体阳性268例,阳性率高达50.95%,表明JEV不仅是当地虫媒病毒脑炎的主要病原,也是当地病毒性脑炎的主要致病病因。病毒性脑炎病例中还检测到DENV、BAV和RRV病毒IgM抗体阳性病例,提示这3种虫媒病毒也可引起脑炎。此外,病毒性脑炎病例中COXV、ECHOV、HSV和MuV阳性率较高,认为肠道病毒中的COXV和ECHOV、呼吸道病毒中的MuV以及HSV也是脑炎的重要病毒病原,其中COXV和ECHOV引起脑炎的病原学意义更大。221例不明原因发热病人中,存在有JEV、DENV、BAV、RRV和BFV感染病例,这5种虫媒病毒的总阳性率为56.56%(.125例),提示虫媒病毒仍是当地不明原因发热的主要病原。肠道病毒(COXV和ECHOV)、呼吸道病毒(MuV和MV)和HSV病毒也是不明原因发热性疾病的重要病原,其中尤以HSV和MuV更为重要。在虫媒病毒感染中,除乙脑外,BAV可能是当地病毒性脑炎和不明原因发热疾病的重要的病因。本次还成功构建了版纳病毒IgM抗体间接ELISA检测方法,不仅完成了本研究项目的标本检测工作,并为今后开展该病毒调查研究奠定了基础。本研究丰富了病毒性脑炎和不明原因发热病例的病因研究内容,获得的大量数据为下一步病原学和分子生物学检测研究提供了参考资料,并为深入开展病毒性脑炎和不明原因发热疾病的防治研究积累了基础资料。本研究结果表明,加强病毒性脑炎和不明原因发热性疾病的监测、病毒学检测和防治工作是当前面临的重要公共卫生问题。