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免疫抑制性疾病在兽医临床上普遍存在,给养殖业带来巨大损失。而针对免疫抑制性疾病的清除,除开发新型佐剂、新型疫苗外,免疫增强剂的研究也备受关注。女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait.的干燥成熟果实,性味甘、苦,凉;归肝、肾经;具有补肝肾,强筋骨,明目的功能;主治阴虚内热,腰肢无力,肾虚滑精,视力减退。现代研究表明,女贞子含有萜类、苯乙醇类、黄酮类等多种成分,具有免疫调节、抗炎、抗氧化、保肝等作用。前期研究表明,女贞子正丁醇部位提取物和从该提取物中分离得到的单体化合物羟基酪醇在体外具有较好的免疫调节作用,但其在体内是否仍具有免疫调节作用未知。本研究经液-液萃取法制备得到女贞子正丁醇部位提取物,并通过薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)对女贞子正丁醇部位提取物中的羟基酪醇进行鉴别和含量测定后,借助环磷酰胺小鼠免疫抑制模型,研究了女贞子正丁醇部位提取物和羟基酪醇对免疫抑制小鼠的免疫调节作用,取得以下结果。(1)女贞子正丁醇部位提取物中羟基酪醇的鉴别和含量测定通过液-液萃取法制备得到女贞子正丁醇部位提取物,采用TLC和HPLC法对该提取物中的羟基酪醇进行鉴别和含量测定。结果表明,以氯仿:甲醇:水:甲酸(V:V)=8:2:0.1:0.1为展开剂,展开,取出,晾干,碘蒸气显色,供试品和对照品在色谱相应位置上,显相同颜色斑点;在色谱柱:Utimate-XBC18(250 mm×4.60 mm×5μm),流动相:水:甲醇:甲酸(V:V)=85:15:0.12,检测波长280 nm,流速0.8 m L/min,柱温28℃,进样量5μL的色谱条件下,羟基酪醇的标准曲线为y=6592.5x-43832(r=0.9999),含量在33.33~200μg/m L的范围内与峰面积具有良好的线性关系,所得主峰分离度2.318,理论塔板数11476,精密度、重复性和加样回收率良好。说明该TLC和HPLC法适用于女贞子正丁醇部位提取物中羟基酪醇的鉴别和含量测定。经检测女贞子正丁醇部位提取物中羟基酪醇含量为1.5964 mg/g。(2)女贞子正丁醇部位提取物对免疫抑制小鼠的免疫调节作用环磷酰胺免疫抑制模型建立:昆明小鼠12只,随机分为4组,分别为环磷酰胺高、中、低剂量组(200、150、100 mg/kg,腹腔注射,每天1次,连用3 d)和健康组,以小鼠脾脏组织形态变化为评价指标,筛选环磷酰胺造模剂量。结果表明,150和200 mg/kg环磷酰胺组剂量偏高,可造成小鼠脾脏白髓淋巴细胞减少,网状内皮细胞和巨噬细胞增生,而100 mg/kg环磷酰胺仅可造成小鼠白髓内淋巴细胞减少,且免疫抑制程度适度。因此,选择以100 mg/kg环磷酰胺,腹腔注射,连用3 d,建立免疫抑制模型。女贞子正丁醇部位提取物对免疫抑制小鼠的免疫调节作用:昆明小鼠150只,随机分为6组,分别为女贞子正丁醇部位提取物高、中、低剂量组(800、400、200 mg/kg),阳性药物组(左旋咪唑40 mg/kg),模型组和健康组。除健康组外其他各组小鼠腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg,每天1次,连续3 d,随后灌胃相应药物,每天1次,连续7 d。结果表明,女贞子正丁醇部位提取物不同剂量组小鼠脾脏组织淋巴细胞和髓样细胞明显增多;与模型组相比,不同剂量组胸腺指数和800 mg/kg剂量组小鼠脾脏指数显著升高(P<0.05);400,800 mg/kg剂量组小鼠T、B淋巴细胞增殖活性和小鼠巨噬细胞吞噬活性显著增强(P<0.05);400,800 mg/kg剂量组小鼠血清Ig G水平显著升高(P<0.05);800 mg/kg剂量组小鼠血清MDA含量显著降低(P<0.05),且显著低于阳性药物组(P<0.05)。说明女贞子正丁醇部位提取物对免疫抑制小鼠具有显著的免疫增强作用。(3)羟基酪醇对免疫抑制小鼠的免疫调节作用昆明小鼠150只,随机分为6组,分别为羟基酪醇高、中、低剂量组(50、10、2 mg/kg),阳性药物组(左旋咪唑40 mg/kg),模型组和健康组。除健康组外其他各组小鼠腹腔注射环磷酰胺100 mg/kg,每天1次,连续3 d,随后灌胃相应药物,每天1次,连续7 d。结果表明,羟基酪醇不同剂量组小鼠脾脏组织淋巴细胞明显增多,2 mg/kg剂量组红髓髓样细胞明显增多,10、50 mg/kg剂量组红髓髓样细胞明显减少;不同剂量组胸腺指数显著升高(P<0.05),且3个剂量组间差异显著(P<0.05);2、10 mg/kg剂量组脾脏指数显著升高(P<0.05),50 mg/kg剂量组脾脏指数显著降低(P<0.05)。10、50 mg/kg剂量组小鼠T、B淋巴细胞增殖活性显著增强(P<0.05);50 mg/kg剂量组小鼠巨噬细胞吞噬活性显著增强(P<0.05);10、50 mg/kg剂量组小鼠血清Ig G水平显著升高(P<0.05));50 mg/kg剂量组小鼠血清MDA含量显著降低(P<0.05)。说明羟基酪醇对免疫抑制小鼠具有显著的免疫增强作用。综上,本试验所制备的女贞子正丁醇部位提取物中羟基酪醇含量1.5964 mg/g,该提取物及其单体化合物羟基酪醇对免疫抑制小鼠具有免疫增强作用。