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干扰素-λs(Interferon-λs,IFN-λs)是近年来发现的一类新型干扰素,在基因组结构上与IL-10家族成员相似,而在氨基酸组成和功能方面与I型IFN接近。IFN-λs的受体由特有的配基结合亚基lFN-λR1和辅助亚基IL-10R2组成,属于Ⅱ型细胞因子受体家族。虽然IFN-λs结合的受体与Ⅰ型IFN结合的受体完全不同,但是它们均可通过激活Jak-STAT通路传递配基结合信号,因此IFN-λs显示出了与Ⅰ型IFN相似的抗病毒、抗肿瘤增殖和免疫调节活性。与Ⅰ型IFN受体不同的是IFN-λR1的表达具有组织特异性,在骨髓造血细胞及脑、脊髓中枢神经细胞表达量很低,使得IFN-λs对于中枢神经系统及骨髓造血系统的毒副作用降低。这些特性使IFN-λ具有潜在的、巨大的临床应用前景。此外,是否还有其它蛋白参与IFN-λ与其特异受体IFN-λR1的相互作用及信号转导,并进而影响IFN-λ的生物学活性,亦是我们关注的问题。氨基酸序列分析中发现,IFN-λR1的膜内区中含有一个与肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor Necrosis Factor Receptor Associated Factors,TRAF6)相互作用的模体。前期工作中己对IFN-λR1的膜内区与TRAF6的相互作用进行了验证,并初步观察了两者相互作用的生物学活性。本研究的目的是进一步研究在IFN-λ的刺激下,IFN-λR1与TRAF6相互作用的生物学活性。首先,利用毕赤酵母体系表达了重组人IFN-λ1(rhIFN-λ1),通过阳离子交换和凝胶过滤两步柱层析纯化重组蛋白,用ISRE报告基因实验检验生物活性,制备了纯度大于90%且生物活性良好的rhIFN-λ1.然后通过多次PCR将信号肽序列引入IFN-λR1的cDNA片段上,构建带有信号肽的全长IFN-λ1融合蛋白表达载体pMyc-IFN-λR1.pEGFP-IFN-λR1和pFlag-IFN-λR1,用细胞免疫荧光和膜蛋白分离实验验证表达的IFN-λR1可以定位在细胞膜上。将IFN-λR1和TRAF6共转染细胞后,给予rhIFN-λ1刺激,用免疫共沉淀实验观察不同刺激时间下IFN-λR1和TRAF6相互作用的变化。结果显示,在rhIFN-λ1长时间的刺激下,IFN-λR1和TRAF6仍能够相互作用,短时间的rhIFN-λ1刺激会减弱二者的相互作用。细胞共转染IFN-λ1和TRAF6后,过表达的IFN-λR1能够抑制TRAF6诱导的NF-κB报告基因的活性,p38的磷酸化水平也受到抑制。双荧光素报告酶基因实验和实时定量PCR实验显示,共转染的TRAF6可以抑制rhIFN-λ1与IFN-λR1结合后引起的ISRE报告基因的活性和下调抗病毒基因OAS1、Mxl的mRNA表达水平。利用野生型泛素蛋白和泛素蛋白突变体质粒与IFN-λR1和TRAF6共转染细胞后,免疫沉淀结合Western blot实验显示,IFN-λR1在TRAF6的作用下发生了63位赖氨酸泛素蛋白连接的泛素化,rhIFN-λ1的刺激可以增强这种泛素化作用。上述研究结果为促进IFN-λ1的应用研究,认识TRAF6作为IFN-λR1的新的相互作用蛋白在IFN-λ的信号传导通路中的作用提供了新的线索。