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目的：肝癌术后的复发转移是进一步提高人肝癌远期疗效的瓶颈。已有研究表明上皮间质转化(epithelial mesenchymal transitions, EMT)是人肝癌发生侵袭转移的重要原因,但其作用机制尚不明确。我们的前期工作发现,在不同转移潜能肝癌组织内,TMPRSS4及EMT相关基因产物E-cadherin、vimentin和fibronectin的表达情况：TMPRSS4表达高的肝癌组织中E-cadherin表达降低,而vimentin和fibronectin的表达升高。提示TMPRSS4与肝癌EMT的发生可能存在一定的相关性。本实验着重研究TMPRSS4在肝癌EMT发生中的作用及其相关机制,应用慢病毒转染技术调控肝癌细胞BEL-7402中TMPRSS4的表达,观察TMPRSS4对肝癌细胞侵袭转移潜能及EMT相关基因产物表达的影响,明确TMPRSS4在肝癌EMT发生及侵袭转移中的作用,从而为预测肝癌的复发转移和靶向治疗提供新的思路。方法：1.构建细胞株构建慢病毒载体LV-TMPRSS4,将其转染BEL-7402人肝癌细胞株,建立过表达TMPRSS4的BEL-7402细胞株。2.实验分组实验组分为正常BEL-7402对照组(control)、LV-GFP空白载体对照组(LV-GFP)、LV-TMPRSS4过表达组(LV-TMPRSS4).3.观察指标BEL-7402人肝癌细胞转染慢病毒载体LV-TMPRSS4后观察细胞形态学变化,用RT-PCR及Western Blot检测转染后TMPRSS4表达情况。用CCK-8、Transwell、Western Blot等技术检测细胞过表达TMPRSS4后其增殖、侵袭能力的变化以及EMT相关基因产物如E-cadherin、Vimenti、Fibronectin表达变化。结果：1.转染后TMPRSS4表达增强RT-PCR显示转染后,LV-TMPRSS4组细胞TMPRSS4mRNA表达增强。Western Blot结果显示,与正常对照组和LV-GFP空白载体组比较,LV-TMPRSS4过表达组细胞TMPRSS4蛋白表达显著增强,而正常对照组与LV-GFP空白载体组TMPRSS4蛋白表达无明显差异。说明人肝细胞癌细胞株BEL-7402转染目的基因TMPRSS4成功。2.BEL-7402细胞过表达TMPRSS4后形态学变化BEL-7402人肝癌细胞转染LV-TMPRSS4后细胞形态变化明显,由原来的卵石型变为长梭型。3.BEL-7402细胞过表达TMPRSS4后增殖能力无明显变化CCK-8实验结果显示,正常对照组、LV-GFP空白载体对照组及LV-TMPRSS4过表达组细胞增殖能力无显著差异(P>0.05)。说明TMPRSS4过表达对BEL-7402细胞株的增殖无显著影响。4.BEL-7402细胞过表达TMPRSS4后迁移能力显著增强细胞划痕实验检测三组细胞的迁移能力,发现LV-TMPRSS4过表达组细胞迁移能力显著加强,而正常对照组和LV-GFP空白载体对照组之间无显著差异。5.BEL-7402细胞过表达TMPRSS4后侵袭能力增强transwell侵袭实验显示LV-TMPRSS4过表达组细胞穿过Matrigel胶到达Transwell小室膜背面的细胞数为44.0±2.6,显著高于正常对照组(15.7±2.1)和LV-GFP空白载体对照组(16.7±2.1)(P<0.05)。提示TMPRSS4过表达后BEL-7402细胞的侵袭能力明显增强。6.BEL-7402细胞过表达TMPRSS4后EMT相关基因产物表达变化Western Blot结果显示,与正常对照组和LV-GFP空白载体对照组相比,LV-TMPRSS4过表达组细胞E-cadherin表达明显降低,Vimentin、Fibronectin表达升高。结论：1.TMPRSS4过表达可使人肝细胞癌细胞株BEL-7402的细胞形态由卵石型转变为长梭型,利于肿瘤细胞向周围及远处侵袭转移。2. TMPRSS4过表达可显著增强BEL-7402细胞的迁移和侵袭能力,但不影响细胞增殖。3. TMPRSS4过表达使BEL-7402细胞中EMT相关蛋白E-cadherin表达降低而Vimentin和Fibronectin表达升高,提示TMPRSS4可诱导BEL-7402细胞发生EMT而促进肝癌的侵袭转移。4. TMPRSS4与肝癌的侵袭转移密切相关,是治疗肝癌的潜在靶点。