卵巢癌化疗免疫“窗口期”的监测及其对肿瘤免疫应答影响的实验研究

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目的: 1.揭示紫杉醇联合卡铂对卵巢癌患者免疫系统的影响,探询化疗后存在免疫功能逆转之“窗口期”; 2.证实紫杉醇联合卡铂诱导的凋亡卵巢癌细胞的免疫原性,阐述机疫功能逆转的部分原因及为化疗联合免疫治疗提供一定理论基础; 3.采用荷瘤动物模型经化疗联合主动、被动免疫治疗,初步探讨化疫“窗口期”对肿瘤免疫应答的影响及其可能的免疫学机制。 方法: 1.体外检测紫杉醇联合卡铂诱导凋亡卵巢癌细胞对DC分化和诱导T细胞杀伤肿瘤细胞的作用; 2.取卵巢上皮癌(III、IV期)标准术后行紫杉醇联合卡铂化疗患者3例,于化疗各个时期行淋巴细胞数量和功能变化;3.以荷瘤大鼠为研究对象,检测紫杉醇联合卡铂对荷瘤鼠免疫功能,同时根据免疫功能改变的不同时期给予主动与被动免疫治疗,观瘤体积及机体免疫功能改变。 研究结果: 1.紫杉醇联合卡铂诱导的凋亡卵巢癌细胞可以促进DC的成熟并被有效地提呈给免疫细胞,从而促进CD8+T细胞增殖并增加其杀伤功能; 2.紫杉醇联合卡铂诱导卵巢癌患者淋巴细胞减少,并在一个完整的化疗周期中,淋巴细胞的数量、淋巴细胞亚群绝对数在化疗后早期下降最低,到化疗晚期则已恢复到化疗前水平;在整个化疗后恢复的过程中,原始T细胞下降而记忆T细胞比例明显上升;CD8+T细胞IFN-γ分泌能力在化疗中期达到最高,化疗晚期降到化疗前水平,表明卵巢癌患者经化疗后存在免疫“窗口期”; 3.对荷瘤鼠化疗后不同时期给予CTL转输或疫苗治疗,未治疗组鼠瘤体生长最迅速,而两组免疫治疗组较平缓,其中化疗后第6天即淋巴细胞数量最少期给予免疫治疗肿瘤生长最缓慢;CT扫描结果显示,所有治疗组瘤体积较未治疗组体积均小且有差异;化疗后6天+免疫治疗组瘤体积最小且与其余治疗组有统计学意义;荷瘤鼠免疫功能显示:化疗后6天+免疫组淋巴细胞抗原特异性增殖最为明显;CD8+T细胞数量在化疗后6天联合免疫治疗组中增高且与疫苗组、CTL组有显著性差别;而Treg细胞在化疗后6天+免疫组明显降低较其余组间有显著差异;具有分泌INF-γ杀伤功能的细胞在化疗后6天+免疫治疗组最高。 研究结论: 本研究以临床上寻找化疗免疫“窗口期”为出发点,通过监测卵巢上皮癌(III、IV期)标准术后行紫杉醇联合卡铂化疗患者的各个化疗时期淋巴细胞数量和功能变化,初步明确了卵巢癌患者经化疗后存在免疫“窗口期”及其相关免疫指标,表明紫杉醇联合卡铂可以打破患者体内原有的抗肿瘤免疫抑制状态,机体有可能通过免疫重建诱生了增强的抗肿瘤免疫应答,从而使抗肿瘤免疫抑制状态得到暂时逆转;在此基础上,采用荷瘤鼠模型观察不同免疫“窗口期”对抗肿瘤免疫应答的影响,结果表明紫杉醇和卡铂联合CTL、疫苗治疗肿瘤具有协同作用,其中化疗后6天(即淋巴细胞降到最低期)是CTL、疫苗免疫治疗的最佳时间点,本研究结果提示化疗造成的肿瘤个体免疫功能的低下或是免疫系统空间的释放(所谓的免疫“窗口期”),为诱导特异性的抗肿瘤免疫应答提供了可能,在为肿瘤患者设计临床化疗联合免疫治疗方案同时,患者免疫状态的检测是保证治疗有效性的重要前提之一。
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