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[目的]本实验拟通过体外细胞实验探明细胞骨架蛋白coronin3对胶质瘤细胞T98G侵袭能力的影响,研究不同TGF-β浓度对脑胶质瘤细胞T98G上皮-间质转化的诱导作用以及对细胞形态、迁移能力的影响,为后期研究coronin3是否参与脑胶质瘤EMT进程提供依据。[方法]①在体外细胞培养的条件下,将coronin3过表达空质粒组、coronin3过表达组、野生型T98G组、coronin3沉默空质粒组、coronin3沉默组分别进行transwell细胞迁移实验和transwell细胞侵袭实验(含matrigel)。通过两两的组间比较,探明细胞骨架蛋白coronin3对脑胶质瘤细胞T98G的迁移及侵袭能力的影响。②在体外细胞培养的条件下,取对数生长期的T98G细胞接种于培养瓶,每瓶约106个细胞,当细胞生长至70%-80%汇合度时,使用无血清培养基饥饿24小时,再加入TGF-β,使终浓度为Ong/ml(空白对照组)、10ng/ml、20ng/ml、30ng/ml,培养48小时后收集细胞蛋白,western blot鉴定每个组别上皮标志物上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志物波形蛋白(vimentin)的表达情况,并观察细胞形态及迁移能力的变化。[结果]①细胞迁移实验:coronin3过表达空质粒组、coronin3过表达组、野生型T98G组、coronin3沉默空质粒组、coronin3沉默组五个小组,coronin3过表达空质粒组穿过小室膜的细胞数为(99.80±9.41),coronin3过表达组穿过小室膜的细胞数为(125.20±11.77),野生型T98G组穿过小室膜的细胞数为(103.40±7.50),coronin3沉默空质粒组穿过小室膜的细胞数为(98.20±8.34),coronin3沉默组穿过小室膜的细胞数为(74.20±8.22)。两组之间相互比较,P<0.05表示差异有统计学意义。将coronin3过表达空质粒组和coronin3过表达组进行比较,得出P<0.05,差异有统计学意义;将coronin3沉默空质粒组和coronin3沉默组进行比较,得出P<0.05,差异有统计学意义;分别将coronin3过表达空质粒组、coronin3过表达组、coronin3沉默空质粒组、coronin3沉默组与野生型T98G组进行比较,得出coronin3过表达组、coronin3沉默组与野生型T98G组之间,P<0.05,差异有统计学意义;coronin3过表达空质粒组、coronin3沉默空质粒组与野生型T98G组之间,P>0.05,差异无统计学意义。②细胞侵袭实验:Coronin3过表达空质粒组、coronin3过表达组、野生型T98G组、coronin3沉默空质粒组、coronin3沉默组五个小组,coronin3过表达空质粒组穿过基质胶膜的细胞数为(77.00±8.30),coronin3过表达组穿过基质胶膜的细胞数为(135.60±10.69),野生型T98G组穿过基质胶膜的细胞数为(84.60±6.80),coronin3沉默空质粒组穿过基质胶膜的细胞数为(81.80±7.46),coronin3沉默组穿过基质胶膜的细胞数为(48.00±9.21)。两组之间相互比较,P<0.05表示差异有统计学意义。将coronin3过表达空质粒组和coronin3过表达组进行比较,得出p<0.01,差异有统计学意义;将coronin3沉默空质粒组和coronin3沉默组进行比较,得出P<0.01,差异有统计学意义;分别将coronin3过表达空质粒组、coronin3过表达组、coronin3沉默空质粒组、coronin3沉默组与野生型T98G组进行比较,得出coronin3过表达组、coronin3沉默组与野生型T98G组之间,P<0.01,差异有统计学意义;coronin3过表达空质粒组、coronin3沉默空质粒组与野生型T98G组之间,P>0.05,差异无统计学意义。③使用不同浓度的TGF-β作用野生型T98G细胞48小时后,上皮标志物上皮钙黏蛋白的相对表达水平随着TGF-β浓度的升高而逐渐降低,各浓度TGF-β组T98G细胞中上皮钙黏蛋白的相对表达水平分别较空白对照组(Ong/ml)降低37.2%(P>0.05)、64.7%(P<0.05)、76.4%(P<0.05)。使用不同浓度的TGF-β作用野生型T98G细胞48小时后,间质性标志物波形蛋白的相对表达水平随着TGF-β浓度的增高而逐渐增高,各浓度TGF-β组T98G细胞中波形蛋白的相对表达水平较空白对照组(Ong/ml)增加9%(P>0.05),154%(P<0.05),363%(P<0.01)。与空白对照组(0ng/ml)相比,20ng/ml TGF-β组 T98G 细胞形态发生了比较明显的变化,细胞变得更为细长,呈拉伸状、长梭形改变,细胞间连接松散,并且呈现更为分散的生长模式。设置野生型T98G组和野生型T98G组(含TGF-β)进行细胞迁移实验,野生型T98G组穿过小室膜的细胞数为(91.40±6.65),野生型T98G组(含TGF-β)穿过小室膜的细胞数为(117.60±8.73),将二者进行比较,P<0.05,差异有统计学意义。[结论]①coronin3表达量的升高可提高脑胶质瘤T98G细胞的迁移能力及侵袭能力。②一定浓度范围内,TGF-β能以浓度依赖方式诱导脑胶质瘤T98G细胞发生上皮-间质转化(EMT)。