安吉白茶白期叶与绿期叶差异表达基因的全长cDNA克隆与原核表达

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安吉白茶是在浙江安吉发现的茶树自然突变体,其特异性主要表现在春季发芽时新梢嫩叶叶色的可逆性白化现象,在白化过程中新梢的叶绿素含量急剧下降;氨基酸含量显著上升。本文对SSH和cDNA-AFLP分析所得到的差异表达基因进行全长cDNA克隆和原核表达,获得如下主要研究结果:1.应用SMART-RACE技术,对在安吉白茶绿期叶中高效表达的钙调热激蛋白基因进行全长cDNA克隆。cDNA的5’RACE反应得到长为229bp的5端序列,cDNA的3’RACE反应得到长为1743 bp的3端序列,通过拼接得到长为1939 bp的全长cDNA序列。2.通过NCBI数据库及DNAStar软件对钙调热激蛋白(CHSP)全长cDNA序列进行开放式阅读框(ORF)分析,预测钙调热激蛋白cDNA的最大ORF从208个碱基开始,到1558个碱基终止,1380个碱基共编码459个氨基酸,目的蛋白的大小约为52 kD。构建表达载体,然后将载体转入表达菌株中,并诱导原核表达。结果表明,表达蛋白的分子量大小和预测的一致。3.应用SMART-RACE技术,对在安吉白茶白期叶中高效表达的泛素活化酶基因进行全长cDNA克隆。cDNA的5’RACE反应得到长为916bp的5端序列,cDNA的3’RACE反应得到长为2965 bp的3端序列,通过拼接得到长为3764 bp的全长cDNA序列。本研究结果为进一步研究钙调热激蛋白基因与泛素活化酶基因在安吉白茶不同发育时期和不同部位的表达差异奠定了基础。
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