论文部分内容阅读
第一部分:Nrf2/HO-1信号通路在百草枯中毒致大鼠肺损伤的作用机制目的:观察Nrf2/HO-1信号通路在百草枯中毒大鼠中的表达及意义。方法:将48只SD大鼠按随机数字表法分为2组,即对照组（NS组）、中毒组（PQ组）,每组按1d,3d,7d处理,每个时间点8只大鼠。采用腹腔注射百草枯（20mg/kg）制备肺损伤动物模型,对照组予以等量生理盐水替代。于各时间点迅速处死大鼠并取材（血液及肺组织）。苏木素-伊红染色（HE）观察大鼠肺组织情况;肺组织用于检测W/D比值观察肺水肿情况和MDA含量和SOD活力测定;血清离心后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中SAA-1、TNF-α细胞因子的浓度水平;RT-PCR和Western Blot检测肺组织中Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白的表达。结果:与对照组比较,中毒组大鼠肺泡内炎性细胞浸润、肺间隔增宽、肺泡结构破坏;肺W/D比值升高;血清中血清中SAA-1和TNF-α的表达水平升高（P<0.05）;肺组织中MDA表达增高,SOD活性降低;肺组织中Nrf2、HO-1 m RNA和蛋白的表达水平在各个时间点均显著增高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:证实了PQ中毒导致的肺损伤发生后,为了维持大鼠体内的氧化还原平衡,Nrf2/HO-1信号通路激活,抑制免疫因子的释放及炎症反应,起到保护肺损伤的作用。第二部分:重组人脑利钠肽对百草枯致大鼠肺损伤保护作用的机制目的:本研究旨在研究重组人脑利钠肽治疗PQ诱导的肺损伤保护机制。方法:将90只健康雌性SPF级SD大鼠按随机数字表法分为3组,即对照组（NS组）、中毒组（PQ组）和干预组（PQ+rh BNP组）,每组30只,PQ组大鼠腹腔注射百草枯（30mg/kg）,对照组给予等量的生理盐水腹腔注射,PQ+rh BNP组在给予腹腔注射单剂量的百草枯（30mg/kg）后1h行尾静脉注射rh BNP（20ug/kg）,观察并记录其7天死亡率;将72只健康雌性SPF级SD大鼠按随机数字表法分为3组,即对照组（NS组）、中毒组（PQ组）和干预组（PQ+rh BNP组）,每组按1d,3d,7d处理,每个时间点8只大鼠。采用腹腔注射百草枯（20mg/kg）制备肺损伤动物模型,干预组腹腔注射百草枯1h后尾静脉注射rh BNP,对照组等量生理盐水腹腔注射。于各时间点迅速处死大鼠并取材（血液及肺组织）。苏木素-伊红染色（HE）观察大鼠肺组织情况;肺组织检测W/D比值观察肺水肿情况和MDA、SOD、GSH-Px含量测定;血清离心后通过（ELISA）检测血清中IL-1β、TNF-α细胞因子的浓度水平;RT-PCR和Western Blot检测肺组织中Nrf2、HO-1、TGF-β1、IL-10 m RNA的表达水平和肺组织Nrf2、HO-1、TGF-β1、α-SMA蛋白的表达。结果:百草枯大鼠肺损伤模型成功制备。1)各组在第一天均无大鼠死亡,死亡集中在2-6天。PQ组大鼠从第1天起死亡病例依次为0、8、4、4、1、0、0,整体死亡率为56.67%;PQ+rh BNP组第1天起死亡病例为0、2、3、3、0、1、0,整体死亡率为30.00%。2)与对照组比较,PQ组和PQ+rh BNP组大鼠肺泡内均有炎性细胞浸润、肺间隔增宽、肺泡结构破坏,但PQ+rh BNP组各项情况较中毒组轻。3)与对照组比较,PQ组和PQ+rh BNP组大鼠肺干湿重比均升高,且都随着PQ中毒时间逐渐升高;但PQ+rh BNP组在各时间点肺干湿重比较PQ组低。4)ELISA检测发现与对照组比较,PQ组和PQ+rhBNP组大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量升高,但在经过rhBNP治疗后PQ+rhBNP组大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量则低于PQ组。5)与对照组比较,PQ组和PQ+rh BNP组肺组织中MDA含量升高、SOD活性和GSH-PX含量降低,在经过rh BNP治疗后PQ+rh BNP组的MDA含量则低于PQ组、SOD活性和GSH-PX含量则高于PQ组,差异有计学意义（P<0.05）。6)RT-PCR显示与对照组相比,PQ组和PQ+rhBNP组大鼠肺组织中Nrf2,HO-1、TGF-β1和IL-10 m RNA的表达的表达均显著增高,但与PQ组相比,在经过rh BNP治疗后PQ+rh BNP组中Nrf2和HO-1 m RNA的表达高于PQ组,TGF-β1和IL-10 m RNA的表达则低于PQ组,。7)Western-blot结果显示与对照组相比,PQ组和PQ+rh BNP组大鼠肺组织中Nrf2、HO-1、TGF-β1、α-SMA的蛋白表达水平显增高,但与PQ组相比,PQ+rh BNP组肺组织中Nrf2,HO-1蛋白表达显著增高,TGF-β1和α-SMA的蛋白表达则低于PQ组。结论:重组人脑利钠肽对PQ所致的大鼠肺损伤具有保护作用,可能通过Nrf2/HO-1信号通路来改善PQ中毒所致的氧化应激及炎症性肺损伤。