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目的利用结核分枝杆菌超氧化物歧化酶(superoxidaseA，SodA)多肽建立结节病肉芽肿C57BL/6小鼠模型。研究结节病肉芽肿小鼠模型肺组织内Treg/Th17细胞分化的改变及一些相关细胞因子表达水平的变化，分析Treg/Th17细胞分化与相关细胞因子水平变化的关系，进一步探索结节病发病的免疫学机制。方法一．结节病肉芽肿C57BL/6小鼠模型的制备及鉴定21只雌性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为3组：第1天：实验组A组：皮下注射SodA50μg与不完全弗氏佐剂(IFA)0.25ml，B组：皮下注射IFA0.25ml+PBS0.25ml；C组：皮下注射PBS0.5ml。第14天：A组：SodA与琼脂糖珠共价偶联于0.5mlPBS(SodA50μg+琼脂糖珠6000粒)中，尾静脉注射；B组：琼脂糖珠6000粒(溶于0.5mlPBS)尾静脉注射；C组：PBS0.5ml尾静脉注射；第22天小鼠麻醉脱颈椎处死。观察小鼠肺部及外周淋巴结大体变化；HE染色观察肺组织、淋巴结病理组织学变化，观察有无结节病样肉芽肿形成；肉芽肿阳性的切片行免疫组化染色检测巨噬细胞特异性抗原Mac-2及淋巴细胞抗原CD4+T的表达；行支气管肺泡灌洗，检测支气管肺泡灌洗液中(BALF)巨噬细胞、淋巴细胞及中性粒细胞百分比，流式细胞学检测BALF中CD4+/CD8+细胞比例；流式多因子检测技术检测肺组织均浆的Th1型细胞因子IFN-γ、IL-12及Th2型细胞因子IL-4水平。二．结节病小鼠模型肺组织Th17/Treg细胞分化及相关细胞因子水平的变化Q-PCR检测小鼠肺组织内Th17特异性转录因子孤儿核受体γt(Orphan nuclearreceptor gamma t，RORγt)的mRNA及Treg的特异转录因子叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Forkhead/winged helix transcription factor，Foxp3)的mRNA表达，Western Blot检测RORγt、Foxp3的蛋白表达；采用流式多因子检测技术检测肺组织匀浆内与Th17/Treg相关的细胞因子TGF-β、IL-6、IL-17A水平，并分析相关细胞因子与Th17/Treg分化的关系。结果1、A组小鼠解剖后可见外周（颈部、腋下、腹股沟）及肺门等处多发淋巴结明显肿大。B组、C组肺部、外周淋巴结未发现明显异常。2、A组小鼠肺组织及淋巴结切片HE染色后可见支气管周围大量淋巴细胞浸润，肺组织内可见多发非干酪坏死性肉芽肿形成，该肉芽肿中心由类上皮样细胞组成，有的可见多核巨细胞浸润，肉芽肿周边淋巴细胞包绕。淋巴结经病理切片HE染色也可见多个结构类似的类圆形肉芽肿形成。B组肺内可见琼脂糖珠子周围薄层巨噬细胞包裹的异物肉芽肿形成，淋巴结未见明显异常；C组肺部、淋巴结未见明显异常。3、免疫组化染色显示A组肉芽肿中心巨噬细胞特异性抗原Mac-2表达阳性，周边CD4+T淋巴细胞表达阳性。4．A组BALF中淋巴细胞比例、中性粒细胞比例显著高于B、C组，巨噬细胞比例显著低于B、C组(P均＜0.01)；B组淋巴细胞比例高于C组，巨噬细胞比例低于C组(P均＜0.01)；B、C组中性粒细胞比例无统计学差异（P＞0.05）；A组BALF的CD4+/CD8+T淋巴细胞比例显著高于B组(P=0.0019)；5. A组肺组织匀浆上清IL-12、IFN-γ显著高于B、C组(P均＜0.01)，B组、C组之间无统计学差异(P＞0.05)；A组肺组织匀浆上清IL-4表达水平与B、C组之间无显著统计学差异（P＞0.05）。6. A组肺组织Th17转录因子RORγt在mRNA水平和蛋白表达水平显著高于B、C组(P均＜0.05)，B组、C组无统计学差异(P＞0.05)；A组肺组织Treg转录因子Foxp3的mRNA相对表达量显著低于B、C组(P均＜0.05)，B、C组无统计学差异(P＞0.05)；Foxp3蛋白表达水平与B、C组无显著统计学差异(P均＞0.05)。7A组肺组织匀浆上清中IL-6、IL-17A浓度显著高于B、C组(P均＜0.01)，B、C组之间IL-6、IL-17A无统计学差异(P均＞0.05)；各组TGF-β水平无统计学差异(P均＞0.05)；8.小鼠肺组织RORγt mRNA表达和肺组织IL-6水平呈显著正相关(r=0.701,P=0.000)，与IL-17A水平显著正相关(r=0.631,P=0.002)，RORγt蛋白表达与IL-6水平呈显著正相关(r=0.705,P=0.000)，与IL-17A水平显著正相关(r=0.546,P=0.010)。Foxp3的mRNA表达和肺组织IL-6水平呈显著负相关(r=-0.444，P=0.044)，与IL-17A水平呈显著负相关(r=-0.471,P=0.031)。结论1、SodA可诱导C57BL/6小鼠的淋巴结、肺组织形成结节病样非干酪样坏死性肉芽肿，免疫反应特点以Th1型细胞反应为主，该肉芽肿从病理组织形态上、免疫反应特点上均与人类结节病类似，可作为研究结节病免疫机制的动物模型。2、SodA可引起Th17/Treg轴明显失衡及相关细胞因子IL-6、IL-17A表达升高。SodA所致的肉芽肿动物模型Th17/Treg的失衡可能与结节病肉芽肿的形成有关。