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研究背景与目的 动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖是经皮冠状动脉成型术(PTCA)后再狭窄(RS)的主要病理特征,抑制VSMC的增殖已成为治疗再狭窄的重要环节。目前临床防治主要以药物为主,但效果皆不理想,各种物理方法应运而生。已有实验证明,恒磁场对离体兔VSMC增殖有抑制作用。但恒磁场对人动脉VSMC增殖的影响尚未见报道。另有研究表明,在血管壁损伤后各种刺激因素导致VSMC表型改变,从而进入细胞周期是内膜增生及斑块形成的主要病理机制;抑制细胞周期可阻断血管损伤后的内膜VSMC增生;从阻断VSMC细胞增殖周期的角度揭示各种药物或措施的抗增生机制,是再狭窄防治研究的一个重要研究方向。 恒磁场对于人VSMC增殖是否有影响,及其影响VSMC增殖的机理目前尚不清楚。本实验研究了不同强度的恒磁场对人脐动脉VSMC增殖的影响,并用已证实能促进VSMC增殖的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)建立了培养的人脐动脉VSMC增殖模型,观察恒磁场是否具有抑制AngⅡ促VSMC增殖的作用,及对VSMC细胞周期的影响,从细胞增殖周期的角度探讨恒磁场影响VSMC 第四军医大学硕士学位论文 增殖的可能机制。 已有报道:细胞中的带电离子如钾、钠、氯、钙、镁、磷等在磁场的作 用下.其荷电能力可发生改变,影响这些离子的移动速度和排列形式,使细胞 代谢所需酶的活性或功能受到干扰,影响细胞的增殖能力。本实验研究恒磁 场对培养的人脐动脉VSMC胞浆内游离钙离子浓度的影响,探讨恒磁场影 响VSMC增殖的作用机制。 方法 离体培养人脐动脉VSMC,不同强度的恒磁场垂直作用于VSMC,及Aug 11预处理的 VSMC,应用 MTT法,‘H-TdR掺入法观察:不同强度的恒磁场 对人脐动脉 VSMC增殖的影响;应用 MTh法,泊1dR掺入法,流式细胞 仪观察:恒磁场对 Aug 11预处理的 VSMC增殖的影响及对细胞周期的影响; 应用激光共聚焦显微镜技术观察:恒磁场对VSMC胞浆游离钙浓度的影响。 结果采用SPLM软件进行处理。 结果 1.恒磁场作用于人脐动脉平滑肌细胞48h后对其增殖的影响,与恒磁 场的平均磁感应强度有关:0.5、l、2、smT抑制VSMC增殖,10、30、 60 mT促进 VSMC增殖。恒磁场强度与平滑肌细胞增殖之间呈强度倚赖, 非线性关系。 2.平均磁感应强度为 1、5 mT的恒磁场对 Aug 11刺激下的 VSMC增 殖有明显的抑制作用。恒磁场阻止 Aug 11预处理的 VSMC由静止期(GofG 期)进入DNA合成期侣期)和有丝分裂期(GZM期)。 3.恒磁场对人脐动脉血管平滑肌细胞胞浆内游离*”有影响。smT 的恒磁场作用于血管平滑肌细胞后 1060Inin的厂勺较对照组明显下降, 20Inin下降最明显;其平滑肌细胞的吐”荧光强度明显弱于对照组,至 60tnin接近对照组。说明恒磁场明显减轻VSMC胞浆内的“”浓度。 3 第四军医大学硕士学位论文 讨论与结论 1.适宜强度的恒磁场抑制VSMC增殖。 2.恒磁场对 Aug 11刺激下的 VSMC增殖有明显的抑制作用。其作用 机制主要是通过抑制VSMC细胞周期由静止期进入合成期和有丝分裂期 实现的。 3.恒磁场对VSMC胞浆内的*”浓度有明显减少作用,从而抑制了 VSMC细胞的增殖。 4.适宜强度的恒磁场抑制VSMC增殖,是一种具有应用前景的治疗再 狭窄的方法。