论文部分内容阅读
目的 观察冷冻联合诱导分化剂全反式维甲酸（ATRA）对C6大鼠脑胶质瘤的协同诱导分化效应,探讨其生物学特征变化及机制,从而为临床应用提供理论基础。方法 1 C6细胞培养:C6大鼠脑胶质瘤细胞在含10%新生小牛血清、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素的DMEM培养基中,37℃、5%CO2条件下培养。2模型构建:125只雄性Wistar大鼠经10%水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉后,借用立体定向技术及微量注射器,取对数生长期C6细胞1×106/10μ1个,接种于Wistar大鼠脑右侧S1区（第一运动感觉区）。肿瘤生长至第7天,随机取5只大鼠用于模型的鉴定（MRI检测、HE染色）。3分组实验:待肿瘤生长至第7天,直径约4mm时,随机将荷瘤鼠分为四组,每组30只。（1）对照组:无水乙醇和磷酸盐缓冲液按1:9配制,1ml腹腔注射,连续两周;（2）冷冻组:以直径2mm冷冻探头插入肿瘤中心,快速冷冻到整个肿瘤形成冰球时自然复温,重复冻融一次;（3）单纯ATRA组:无水乙醇和磷酸盐缓冲液按1:9配制,加入ATRA,浓度为1mgml-1,1ml腹腔注射,连续两周;（4）冷冻联合ATRA组:冷冻同单纯冷冻组,冷冻后腹腔注射ATRA,方法同ATRA组。于接种的第22天,每组随机取20只瘤鼠按不同要求取材,余10只用于测量肿瘤体积和观察生存期。4免疫组化检测P27Kipl及GFAP蛋白。5流式细胞仪检测细胞周期。6 MRI检测肿瘤体积变化。7观察大鼠生存期。结果 1各处理组P27Kipl和GFAP蛋白表达增高,联合治疗组增高最为显著。2各处理组G1期细胞比例增加,S期细胞比例下降,细胞发生了G1期阻滞,联合组尤为明显。3各处理组较对照组肿瘤体积均缩小,大鼠生存期均延长,以联合组最显著。4 P27Kipl与GFAP蛋白表达、G1期细胞百分比例、大鼠生存期呈正相关;与肿瘤体积呈负相关。结论 冷冻和诱导分化剂全反式维甲酸（ATRA）对C6大鼠脑胶质瘤有诱导分化效应,联合应用有协同效应,其机制同P27Kipl蛋白的上调有关。