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胃癌是在我国常见的恶性肿瘤之一,发病率居高不下,死亡率高,严重危害人类健康,因此,胃癌治疗药物的开发刻不容缓。秦皮乙素是从中药秦皮中提取的一类香豆素类化合物,具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等多种药理作用。近年来的研究表明秦皮乙素具有抑制多种肿瘤的增殖、侵袭迁移和诱导细胞凋亡等作用,并且涉及到多条信号通路。本课题选用人胃癌SGC-7901细胞为研究对象,在以往研究中表明秦皮乙素可以通过线粒体途径和死亡受体途径诱导细胞凋亡,因此本课题以氧化应激和内质网应激为切入点,对秦皮乙素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用机制展开研究,以期为秦皮乙素的抗肿瘤作用提供更加充分的理论依据。方法:(1)Western Blot法检测人胃癌SGC-7901细胞内质网应激相关蛋白GRP78与CHOP的表达;(2)MTT法检测秦皮乙素对SGC-7901细胞增殖的影响;Hoechst33258法检测秦皮乙素对SGC-7901细胞凋亡的影响;(3)H2DCFDA染色法检测秦皮乙素对SGC-7901细胞中ROS水平的影响;MTT法检测NAC对秦皮乙素抑制SGC-7901细胞增殖的影响;Hoechst 33258法检测NAC对秦皮乙素诱导SGC-7901细胞凋亡的影响;(4)Western Blot法检测秦皮乙素对SGC-7901细胞中GRP78、p-PERK、peIF2α、ATF-4、CHOP蛋白表达的影响;MTT法检测TUDCA对秦皮乙素抑制SGC-7901细胞增殖的影响;Hoechst 33258法检测TUDCA对秦皮乙素诱导SGC-7901细胞凋亡的影响;(5)H2DCFDA染色法检测TUDCA对秦皮乙素诱导SGC-7901细胞中ROS水平影响;Western Blot法检测NAC对秦皮乙素诱导SGC-7901细胞中GRP78和CHOP蛋白表达影响。结果:(1)通过Western Blot法检测内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP在人胃癌SGC-7901细胞中有表达,提示GRP78与CHOP等内质网应激相关蛋白表达的平衡与人胃癌SGC-7901细胞的发生发展相关。(2)通过MTT法检测秦皮乙素可以抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖,随着秦皮乙素浓度的增加,细胞存活率越低,具有剂量依赖性;Hoechst 33258染色观察秦皮乙素0.28、0.56、1.12 mmol/L处理细胞后细胞核质的形态学变化,发现随着秦皮乙素浓度的增加,出现了细胞核质固缩、核碎裂等明显的细胞凋亡形态学特征,提示秦皮乙素可通过诱导SGC-7901细胞发生凋亡,发挥其抗癌活性。(3)H2DCFDA染色观察用秦皮乙素0.28、0.56、1.12 mmol/L处理后细胞内ROS水平明显升高并具有剂量依赖性;用100μmol/L的NAC预处理细胞1 h后,MTT法检测NAC+秦皮乙素组细胞存活率(67.25±4.28)%明显高于秦皮乙素组(56.36±4.68)%(P<0.05),表明抑制ROS的产生能抑制秦皮乙素对SGC-7901细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色观察NAC+秦皮乙素组细胞凋亡程度较秦皮乙素组明显降低,表明抑制ROS能抑制秦皮乙素的细胞凋亡作用,提示秦皮乙素诱导SGC-7901细胞凋亡与ROS密切相关。(4)通过Western Blot法检测秦皮乙素0.28、0.56、1.12 mmol/L给药后细胞中GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF-4、CHOP蛋白表达均有不同程度的上调,用50μmol/L的TUDCA预处理细胞1 h后,MTT法检测TUDCA+秦皮乙素组细胞存活率(58.77±3.46)%明显高于秦皮乙素组(48.43±2.51)%(P<0.05),表明抑制ERS能抑制秦皮乙素对SGC-7901细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色观察TUDCA+秦皮乙素组细胞凋亡程度较秦皮乙素组明显降低,表明抑制ERS能抑制秦皮乙素的细胞凋亡作用,提示秦皮乙素可通过内质网应激诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞凋亡。(5)通过H2DCFDA染色观察用50μmol/L的TUDCA预处理细胞1 h后,TUDCA+秦皮乙素组的ROS水平明显低于秦皮乙素组,表示抑制ERS能抑制秦皮乙素诱导ROS的产生;用100μmol/L的NAC预处理细胞1 h后,通过Western Blot法检测NAC+秦皮乙素组GRP78和CHOP蛋白表达较秦皮乙素组均有所减少,表示抑制ROS也能影响ERS的作用,提示秦皮乙素对SGC-7901细胞中ROS和内质网应激具有双重调控作用。结论:GRP78和CHOP内质网应激相关蛋白在人胃癌SGC-7901细胞中有表达,表示GRP78和CHOP等内质网应激相关蛋白与人胃癌SGC-7901细胞的发生发展有关,秦皮乙素可以通过氧化应激和内质网应激抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,促进人胃癌SGC-7901细胞的凋亡,并且ERS能升高人胃癌SGC-7901细胞中ROS的水平,相反,ROS的产生也能诱导ERS的发生,提示秦皮乙素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡机制可能与氧化应激与内质网应激的交互作用有关。