羟基积雪草苷体内外抗辐射损伤及机制研究

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目的:研究羟基积雪草苷(madecassoside,MC)体内外抗辐射作用及其机制。方法:①NIH3T3正常细胞株,采用60Co γ15Gy(每分钟照射2Gy)剂量辐射造成细胞损伤模型,用MTT法观察MC对辐射造成细胞损伤的保护作用;邻苯三酚自氧化法被用来产生超氧阴离子自由基O2-,使用酶标仪测定MC清除超氧阴离子O2-自由基的清除率;使用总SOD活性检测试剂盒(NBT法)检测给药辐射后,细胞裂解液中SOD水平;使用细胞周期试剂盒和细胞凋亡试剂盒考察MC在不同浓度下或者不同时间点对辐射后细胞周期和凋亡的作用。②建立X射线10Gy剂量下小鼠损伤模型,记录小鼠体重变化;测定脾脏指数、胸腺指数;用MTT方法测定脾淋巴细胞增殖;苏木素伊红(hematoxylin and eosim, HE)染色,借助于相应的损伤评分方法考察MC对辐射造成小鼠小肠损伤的保护作用。结果:①MTT结果显示,MC的3个浓度(15μg/mL、7.5μg/mL、3.75μg/mL)均对辐射后的NIH3T3细胞有保护作用,而在1.88μg/mL时显示没有效果;MC浓度在2.0mg/mL时,对O2-自由基的清除率达到44%,但低于同浓度的阳性对照抗坏血酸(VC)(74%);MC浓度在120μg/mL,60μg/mL,30μg/mL能提高细胞裂解液中SOD水平,但在15μg/mL时不能显著提高该水平;辐射后48小时,与模型组细胞相比,MC(7.5μg/mL,3.75μg/mL)能够使细胞S期时长延长,G2期和SubG1期减少,从S期到G2期顺利过渡,缓解了细胞周期的阻滞。细胞分别辐射后24小时、48小时,与模型组相比,15μg/mL的MC可以逆转辐射引起的细胞凋亡,并使细胞达到或接近正常状态。②10Gy辐射后9天内,MC未能阻止接受辐射的小鼠体重的下降;在辐射后第8天,MC可以提高大部分受辐射小鼠的脾脏指数和胸腺指数;MC大剂量组(25mg/kg)能提高脾淋巴细胞增殖活力;形态学观察MC能够使辐射后(5小时、第2天和第8天)的小鼠小肠上皮组织结构趋于完整。结论:MC具有一定的抗辐射作用。其机制可能与抗氧化,防止细胞凋亡和提高小鼠免疫功能有关。
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