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目的1.探讨CGRP对高氧暴露下的小鼠AECⅡ凋亡的作用。2.探讨CGRP对高氧暴露下AECⅡ损伤、凋亡的抑制作用是否涉及AMPK/p53/mTOR反应轴。3.探讨CGRP抑制AECⅡ损伤、凋亡作用过程中细胞自噬所发挥的作用。方法用小鼠肺II型上皮(细胞株MLE-12)作为实验研究对象,采用含5%FBS的DMEM/F12培养基培养MLE-12细胞,当细胞达到80%融合时,按照1:3比例进行传代培养,将扩培后的MLE-12细胞。分别按照3个部分,随机分组处理:第一部分(正常氧组、高氧组、正常氧CGRP干预组、高氧CGRP干预组、高氧CGRP处理拮抗组),第二部分(高氧+CGRP干预对照组、高氧+CGRP+P53过表达组、高氧+CGRP+P53干扰组),第三部分(高氧+CGRP干预对照组、高氧+CGRP+3-MA干预组、高氧+CGRP+雷帕霉素干预组)体外培养24 h后倒置相差显微镜下观察MLE-12细胞生长形态,流式细胞检测法检测各组MLE-12细胞凋亡率,Western blot方法检测凋亡相关蛋白(Caspase-3、Bcl-2)、通路相关蛋白(AMPK、P53、MTOR)、自噬蛋白(Becline-1)表达水平。结果1.与常氧组比较,高氧组AECⅡMLE-12细胞MDA以及凋亡率明显增加(P<0.05),存活率降低;与高氧组比较,高氧CGRP干预组MDA以及凋亡率明显降低(P<0.05),存活率增加;CGRP拮抗剂(CGRP8-37)能阻断CGRP的生物学作用。2.与高氧CGRP干预组比较,高氧+CGRP+P53干扰组,通路相关蛋白P53、AMPK以及抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平明显降低,通路相关蛋白MTOR蛋白以及凋亡蛋白Caspase-3的表达水平明显增加(P<0.05),细胞凋亡率升高;与高氧CGRP干预组比较,高氧+CGRP+P53过表达组,通路相关蛋白P53、AMPK、MTOR以及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2的表达水平无明显增减(p>0.05),细胞凋亡率无明显变化。3.与高氧CGRP干预组比较,高氧+CGRP+3-MA干预组,凋亡蛋白Caspase-3以及自噬蛋白Becline-1的表达水平明显增加、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平明显降低(P<0.05),细胞细胞凋亡率升高,存活率下降;与高氧CGRP干预组比较,高氧+CGRP+雷帕霉素干预组,凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2以及自噬蛋白Becline-1的表达水平无明显变化(p>0.05),细胞细胞凋亡率及存活率无明显增减。结论1.高氧损伤造成MLE-12细胞凋亡,CGRP试剂能有效保护高氧对MLE-12细胞的凋亡作用。2.干扰P53基因表达后AMPK/p53/mTOR反应轴受抑制,CGRP抑制高氧对MLE-12细胞凋亡的保护作用失效。3.降钙素基因相关肽介导AMPK/p53/mTOR反应轴激活细胞自噬减轻AECⅡ损伤和凋亡。