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第一部分 H. pylori对胃癌及癌旁组织Bcl-2家族蛋白表达的影响材料与方法1. 标本来源:收集2001年2月～2002年12月于我院行胃腺癌切除术的重庆地区患者(近4周未服抗H. pylori药物)手术标本共95例,其中男72例,女23例,年龄31～84岁,平均56.6岁,胃癌组织均经病理学确诊,癌旁组织为手术切缘组织,经HE染色确定是不存在癌及癌前病变的组织。胃癌及癌旁组织立即置于-80℃冰箱冻存备用。采用Warthin-Starry银染色法和H. pylori尿素酶基因PCR法诊断H. pylori感染,H. pylori cagA基因PCR法进行cagA+ H. pylori鉴定。Warthin-Starry银染色法和尿素酶基因PCR法均为阳性者诊断为H. pylori感染阳性患者,共58例(其中cagA+ H. pylori感染者占37例),H. pylori感染阴性患者37例。2. 实验指标及方法2.1 半定量RT-PCR法检测Bcl-2、Bid及Bax mRNA表达2.2 Western Blotting法检测Bcl-2、Bid及Bax蛋白表达3. 统计学处理:采用X 2检验和Spearman等级相关分析。结 果1. H. pylori对胃癌及癌旁组织Bcl-2、Bid及Bax mRNA表达的影响1.1 胃癌组织中,Bid和Bax mRNA表达按H. pylori阴性组、cagA- H. pylori感染组和cagA+ H. pylori感染组顺序依次增高(Bid:0.30、0.42和0.85;Bax:0.30、0.65和0.97),且差异有显著性(P<0.05);H. pylori阴性组的Bcl-2 mRNA表达低于cagA- H. pylori感染组和cagA+ H. pylori感染组(0.41 vs. 0.69和0.84,P<0.05),但cagA- H. pylori感染组和cagA+ H. pylori感染组间的Bcl-2表达无显著性差异。1.2 癌旁组织中,Bid、Bax和Bcl-2 mRNA表达按H. pylori阴性组、cagA- H. pylori<WP=10>感染组和cagA+ H. pylori感染组顺序均依次递增(Bid:0.37、0.68和0.93;Bax:0.35、0.64和1.00;Bcl-2:0.37、0.48和0.61),且差异有显著性(P<0.05)。2. H. pylori对胃癌及癌旁组织Bcl-2、Bid及Bax蛋白表达的影响2.1 胃癌组织中,Bid、Bax和Bcl-2蛋白表达按H. pylori阴性组、cagA- H. pylori感染组和cagA+ H. pylori感染组顺序依次增高。2.2 癌旁组织中,Bid、Bax和Bcl-2蛋白表达按H. pylori阴性组、cagA- H. pylori感染组和cagA+ H. pylori感染组顺序均依次递增。3. Bid、Bax和Bcl-2 mRNA在胃癌及癌旁组织中表达的相互关系3.1 H. pylori阴性组中,胃癌组织的Bid和Bax表达与Bcl-2表达呈负相关(Bid vs. Bcl-2,r = -0.40,P<0.05;Bax vs. Bcl-2,r = -0.45,P<0.05)。3.2 H. pylori阳性组中,胃癌组织的Bid和Bax表达与Bcl-2表达无相关性(Bid vs. Bcl-2, r = 0.18, P>0.05; Bax vs. Bcl-2, r = 0.20, P>0.05);癌旁组织的Bid和Bax表达与Bcl-2表达呈正相关(Bid vs. Bcl-2,r = 0.33,P<0.05;Bax vs. Bcl-2,r = 0.29,P<0.05)。讨 论细胞凋亡的信号转导存在两种途径—死亡受体途径和线粒体—Cyt-c途径,其中Bcl-2家族与线粒体—Cyt-c途径的关系十分密切。Bid、Bax和Bcl-2是Bcl-2家族中具有代表性的三个成员,Bid和Bax蛋白能够促进线粒体释放Cyt-c,从而促进细胞凋亡;而Bcl-2则抑制线粒体释放Cyt-c,具有抑制细胞凋亡的作用。在Bcl-2家族调控细胞凋亡的机制中,Bid作为BH3结构域蛋白,是诱发细胞凋亡的起始因素之一,而Bax是这一机制中的关键成员,无论是Bid等BH3结构域蛋白诱发细胞凋亡,还是Bcl-2抑制细胞凋亡,均需要依赖激活或抑制Bax来发挥作用。本研究发现,在胃癌和癌旁组织中,H. pylori均能够上调Bid和Bax表达,且cagA+ H. pylori的作用更强;同时,在胃癌和癌旁组织中,H. pylori还能够上调Bcl-2表达。既然H. pylori对Bid、Bax和Bcl-2的表达都有上调作用,那么这三者之间的关系是怎样的呢?进一步的分析表明,在H. pylori阴性组,胃癌组织的Bid和Bax表达与Bcl-2表达呈负相关,这符合胃癌组织细胞凋亡减少的规律;而在H. pylori阳性组中,胃癌组织的Bid、Bax和Bcl-2的表达均增高,Bid、Bax表达和Bcl-2表达无相关性,癌旁组织的Bid和Bax表达与Bcl-2表达呈正相关,这些结果提示,虽然H. pylori对Bid、Bax和Bcl-2均有上调表达的作用,但在胃黏膜癌变的不同时期所起的作用可能并不完全相同,在慢性胃炎时,H. pylori可能主要上调Bid和Bax这些促凋亡基因的表达,此作用强于其对Bcl-2的上调作用,因而胃黏膜表现出凋亡增多的现象,而在胃黏膜癌变的过程中,H. pylori上调Bcl-2等抑凋亡基因表达的作用可能会逐渐增强,<WP=11>Bcl-2的增多会抵消Bid和Bax的促细胞凋亡作用,细胞凋亡受到抑制,从而造成或加重了胃黏膜癌变过程中凋亡调控基因表达的紊乱。第二部分 H. pylori对胃癌及癌旁组织IL-1β表达的影响材料与方法1. 标本来源:同第一部分。2. 实验指标及方法半定量RT-PCR法检测IL-1β3. 统计学处理:采用X 2检验和Spearman等级相关分析。结 果1. 胃癌组织中,IL-1β mRNA表达按H. pylori阴性组、cagA- H. pylori感染组和cagA+ H. pylori感染组顺序依次增高(0.79、1.18和2.10),且差异有显著性(P<0.05)。2. 癌旁组织中,cagA+ H. pylori感染组的IL-1β mRNA表达高于H. pylori阴性组和cagA- H. pylori感染组(1.03 vs. 0.62和0.75),且差异有显著性(P<0.05)。3. H. pylori阳性组中,胃癌IL-1β mRNA表达与Bid、Bax mRN