【摘 要】
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研究目的:1.筛选遗传稳定的rakicidin B高产菌株2.优化发酵培养基和培养条件3.对菌株次级代谢产物进行提取分离纯化和结构鉴定4.体外检测rakicidin B的抗肿瘤活性实验方法:1.
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研究目的:1.筛选遗传稳定的rakicidin B高产菌株2.优化发酵培养基和培养条件3.对菌株次级代谢产物进行提取分离纯化和结构鉴定4.体外检测rakicidin B的抗肿瘤活性实验方法:1.通过紫外诱变筛选出rakicidin B高产菌株,然后传代考察其稳定性。2.单因素和正交试验优化发酵培养基和培养条件。3.大孔树脂、中压反向C18柱层析和半制备高效液相色谱法分离纯化目标化合物,采用紫外、红外、质谱和核磁进行结构鉴定。4.磺酰罗丹明B比色法检测rakicidin B抗肿瘤活性。研究结果:1.通过紫外诱变,筛选到了遗传稳定性良好的48#菌株,其效价较原始菌株提高了32.1%。2.通过单因素和正交试验,确定了最佳培养基和培养条件:可溶性淀粉6%,蔗糖2%,大豆蛋白胨2%,榴花酵母粉1%,碳酸钙0.1%,硫酸镁0.05%,发酵周期为88h,装液量为100m L,转速220rpm,接种量为5%,消泡剂0.3%。3.通过大孔树脂、中压反向C18柱层析和半制备高效液相色谱等方法,分离得到一个化合物,经紫外、红外、质谱和核磁鉴定其与文献报道的rakicidin B同质。4.rakicidin B对HCT-8、MGC803、A549、A375和Hep G2增殖抑制作用明显,rakicidin B在乏氧条件下对HCT-8细胞的抑制活性是其在常氧条件下13.88倍。结论:1.本研究筛选到了遗传稳定高产的48#菌株,并确定了最佳培养基和培养条件,使发酵效价达到了445.4mg/L,基本达到工业化生产水平。2.rakicidin B具有广谱的抗肿瘤细胞活性且在乏氧状态下活性更强,有潜力成为抗乏氧肿瘤细胞先导化合物。
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