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自2010年以来，猪流行性腹泻在东南亚国家爆发，哺乳仔猪呈高发病率、高死亡率，经济损失严重。目前东南亚、德国及美国都有PED爆发的报道。在发生流行性腹泻的猪群中，猪传染性胃肠炎病毒也有相当高的检出率。对中国流行性腹泻病毒的基因水平研究显示，引起此次流行性腹泻暴发的毒株与我国长期使用的猪流行腹泻疫苗株XXX株有较大差异，尤其是纤突（S）蛋白的N端。此外，XXX株疫苗免疫猪群中依然发生猪流行性腹泻，提示现有疫苗不能给猪群提供完全免疫保护。本论文原核表达猪流行腹泻病毒中国分离株A/C的S基因N端高变区，并将纯化的S蛋白融合到基于XXX株疫苗株的猪传染性胃肠炎-猪流行性腹泻二联灭活疫苗，对所制备二联苗的免疫原性进行了研究，为进一步研制有效防控猪流行性腹泻流行株引起的腹泻和猪传染性胃肠炎的高效疫苗奠定基础。1. PEDV间接ELISA抗体检测方法的建立将表达PEDV XXX株疫苗株S基因N端1077bp（YSA）的PET-28a重组阳性菌在37℃的条件下加入IPTG进行诱导表达，经SDS-PAGE分析表明该蛋白获得了高效表达，表达的蛋白为42KD，且主要以融合蛋白的形式表达。Western blotting分析进一步表明，所表达的蛋白具有良好的反应原性。以纯化的YSA蛋白作为包被抗原建立了PEDV抗体间接ELISA检测方法，抗原最佳包被量为0.5μg/孔，血清最佳稀释度为1:100，二抗最佳稀释度为1:2000，阳性判定标准为待检血清OD450nm值≥0.25。通过30份待检血清与商品化试剂盒相比，符合100%。2.猪传染性胃肠炎-流行性腹泻二联灭活疫苗的研制本实验以pBV220为载体，原核表达了流行株XXX S蛋白N端高变区，命名为LSA蛋白，通过PAGE检测，该蛋白主要以包涵体的形式表达，并将这个LSA蛋白进行纯化。将已纯化的蛋白与PEDV XXX毒株和TGEV XXX株制备灭活疫苗，结果表明加有原核表达的TGE-PED二联灭活疫苗与不加LSA蛋白的TGE-PED二联灭活疫苗免疫后抗体滴度差异显著，且高于商品化疫苗免疫后的抗体滴度，以免疫后得到的血清做中和实验，该血清能够中和XXX株疫苗毒。