论文部分内容阅读
目的:研究白杨素与香叶木素或雷公藤甲素单用及两药联合对人肝癌Hep G2细胞增殖、迁移、细胞周期阻滞及细胞凋亡的影响;其次研究白杨素与香叶木素或雷公藤甲素单用及两药联合对H22实体瘤小鼠的影响,并评价药物在体内的药效。方法:采用MTT比色法检测黄芩苷、黄芩素、香叶木素和白杨素在体外对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞、胃癌BGC-823细胞、肝癌Hep G2细胞增殖的抑制作用;MTT比色法检测白杨素（1.25、2.5、5、10、20μmol/L）与香叶木素（3.125、6.25、12.5、25、50μmol/L）或雷公藤甲素（0.78、1.56、3.125、6.25、12.5 nmol/L）单用及两药联用24、48、72 h后对人肝癌Hep G2细胞增殖抑制作用;Hoechst 33258染色荧光显微镜下分别观察白杨素（10μmol/L）与香叶木素（25μmol/L）或雷公藤甲素（6.25nmol/L）单用及两药联用48 h后对人肝癌Hep G2细胞的形态变化;细胞划痕愈合实验观察白杨素（10μmol/L）与香叶木素（25μmol/L）或雷公藤甲素（6.25nmol/L）单用及两药联用0、24、48 h后对人肝癌Hep G2细胞划痕愈合的影响;流式细胞仪结合Annexin V-FITC/PI双染法、PI单染法分别检测白杨素（10μmol/L）与香叶木素（25μmol/L）或雷公藤甲素（6.25nmol/L）单用及两药联用48 h后对人肝癌细胞Hep G2细胞凋亡和细胞周期的影响;ICR小鼠腋下接种H22细胞建立体内H22实体瘤小鼠模型,将接种后的小鼠分为为正常组（生理盐水）、模型组（药物溶剂）、阳性药组（五氟尿嘧啶,20mg/kg）、雷公藤甲素单用组（0.075 mg/kg）、白杨素单用组（10 mg/kg）、香叶木素单用组（25 mg/kg）、雷公藤甲素+白杨素组（0.075 mg/kg+10 mg/kg）、白杨素+香叶木素组（10 mg/kg+25 mg/kg）,观察不同给药组对实体瘤小鼠肝指数、胸腺指数、脾指数、瘤重及淋巴细胞亚群的影响。结果:（1）MTT实验结果:白杨素和香叶木素均对肝癌Hep G2细胞最敏感,IC50值分别为18.21μmol/L和20.94μmol/L。白杨素与香叶木素或雷公藤甲素单用及两药联用24、48、72 h均可抑制人肝癌Hep G2细胞,其抑制作用与药物浓度和作用时间呈正相关,且联合应用药物IC50值更小。（2）细胞划痕实验结果:雷公藤甲素、香叶木素均能明显抑制细胞迁移,但白杨素抑制细胞迁移作用不明显。（3）Hoechst 33258荧光染色结果:单药组和联合组图像中均观察到细胞核边集固缩、碎裂、染色质高度凝集、出现凋亡小体等现象,其中以联合用药组凋亡细胞数量最多。（4）细胞周期结果:雷公藤甲素对Hep G2细胞各个周期无明显阻滞作用,白杨素阻滞细胞于G1期,香叶木素阻滞细胞于G2期,雷公藤甲素和白杨素联合能阻滞细胞于G1期和G2期,香叶木素与白杨素联用能阻滞细胞于S期和G2期。（5）细胞凋亡结果:白杨素单药组的细胞凋亡率为16.39%,香叶木素单药组的细胞凋亡率为35.17%,雷公藤甲素单药组的细胞凋亡率为5.07%,白杨素+香叶木素组的细胞凋亡率为41.5%,白杨素+雷公藤甲素组的细胞凋亡率为24.9%,均明显高于空白组的3.21%,且联用组高于单药组。（6）H22实体瘤实验:白杨素+香叶木素可显著抑制H22荷瘤小鼠的肿瘤的生长,抑制率达到38.83%,对免疫系统具有一定保护作用;白杨素+雷公藤甲素对H22荷瘤小鼠的肿瘤生长无明显抑制作用,且对免疫系统无明显调节作用。结论:白杨素联合雷公藤甲素、白杨素联合香叶木素这两种联合应用方式,均比单一给药对Hep G2细胞增殖、迁移、周期和凋亡的作用强。体内实验表明白杨素联合香叶木素比单一给药对H22实体瘤的抑制作用强。