基于DNA和石墨烯量子点构建新型荧光传感器及其生物分析应用

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:bianyitijie
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目前,荧光传感器的设计大多是采用商用的有机染料作为荧光基团,通过向体系中先引入猝灭基团(如GO,碳纳米管,金纳米颗粒等)再后续引入待测目标的两步操作,实现“on-off-on”的信号转换调控从而完成检测。这种设计具有一定的优势,可以消除假阳性信号带来的干扰,降低背景荧光信号,同时也能提高传感器的灵敏度,但是其操作相对繁琐且有机染料的荧光稳定性差,从而在一定程度上限制了其应用。石墨烯量子点(GQDs)是一种准零维的新型荧光纳米材料,与传统的半导体量子点和商用荧光染料相比,GQDs表现出低毒性,更好的光学性能和良好的生物相容性。本论文的工作采用GQ Ds替代传统的荧光染料修饰到DNA链的一端,利用DNA的结构转换策略来调控GQDs荧光信号的开关,并引入外切酶的信号放大策略,从而构建了一系列新型荧光传感器,实现了对目标DNA,重金属离子,有机小分子以及生物毒素的高灵敏度检测。(1)我们选择两种不同颜色荧光GQDs来修饰两种探针DNA,HIV(人类免疫缺陷病毒DNA)和HBV(人类乙型肝炎病毒DNA)探针,利用燃烧蜡烛得到的碳纳米颗粒(CNPs)作为荧光猝灭剂,加入到HIV和HBV探针混合溶液中,由于单链探针DNA与CNPs之间存在π-π堆积作用,两种探针DNA都被吸附到CNPs表面,使得其对应修饰的两种GQDs与CNPs近距离接触,发生荧光共振能量转移(FRET),荧光信号猝灭;当HIV和HBV两种待检测目标DNA加入后与探针杂交形成双链DNA从CNPs表面脱离,最终两种GQD s的荧光信号恢复。同时结合Exo Ш的循环信号放大策略,实现了对HIV和HBV两种目标DNA的高灵敏度检测,检测限可以低至6.56 pM和9.5 pM,比无Exo Ш的体系灵敏度提高了 60倍,并且能够实现人血清样品中目标DNA的检测。(2)利用赭曲霉素A(OTA)适配体(aptamer)结构转换策略来调控GQDs聚集/解聚行为,从而构建新型的无猝灭剂的荧光传感器,实现了对OTA的高灵敏检测。首先,GQDs被修饰到aptamer和cDNA(与aptamer部分互补的探针DNA)的对应端位置,得到G QDs修饰的两种DNA:cDNA-GQDs和aptamer-GQDs,检测过程分为两步:1)当 cDNA-GQDs 和 aptamer-GQDs 混合时,由于 aptamer和cDNA之间的杂交诱导所修饰的GQDs聚集从而发生荧光猝灭;2)OTA加入触发GQDs聚集体解聚,荧光恢复。如此可实现对OTA的检测,检测限为13 pg/mL,并成功用于实际红酒样品中OTA的加标回收检测。(3)利用3WJ型DNA分子机器调控GQDs聚集/解聚行为构建了微囊藻毒素-LR(MC-LR)的新型荧光传感器。检测过程分为两个部分:1)DNA杂交形成3WJ型DNA结构,诱导p1和p2两种探针DNA末端修饰的GQDs聚集荧光猝灭;2)加入MC-LR引起3WJ型DNA结构破坏,GQDs解聚,荧光恢复。MC-LR的检测限可以低至19.2pg/mL,并能够实现自来水和湖水样品中MC-LR的检测。此外,基于GQDs聚集/解聚还可实现检测过程的循环往复进行。(4)利用富-胸腺嘧啶DNA修饰的GQDs作为荧光探针设计了一个新型的双功能化荧光传感器检测汞离子(Hg2+)和三聚氰胺。首先将GQDs修饰到能够特异性识别Hg2+的单链DNA的一端,在汞离子存在条件下,Hg2+会与DNA上的胸腺嘧啶结合形成T-Hg2+-T的碱基错配,此时Hg2+与GQDs之间的距离过近,两者之间发生电子转移,造成GQDs荧光猝灭;由于随后加入的三聚氰胺与Hg2+之间的配位作用力更强,能够竞争结合走Hg2+,从而使得GQDs的荧光恢复。基于此设计的“on-off-on”的荧光传感器可以实现对Hg2+与三聚氰胺的高灵敏检测,检测限分别为2.5 nM和4.9 nM,并能够实现实际样品中Hg2+与三聚氰胺的加标回收。最后还构建了以Hg2+与三聚氰胺作为信号输入的荧光逻辑门,只有在Hg2+单独存在时,信号输出才为“1”。
其他文献
目的:研究行为管理技术在儿童口腔临床治疗中是否有作用。方法:按治疗先后顺序,在口腔门诊随机选择3-12岁的牙病患者236人,随机分为两组。试验组118例在治疗中运用行为管理,
在互联网技术日新月异的今天,超载问题日益突出,推荐系统则是这一问题的最优解决方案,能够基于用户的兴趣,在海量信息中迅速匹配到他们所需要的内容。而在现实中,因为物品与物品、人物与人物之间拥有大量的相关数据,基于单机的推荐系统因为性能有限,已难以针对海量的信息数据进行推荐计算。针对推荐系统的可扩展性,已出现了多个解决方案,它们都基于分布式开源软件架构Apache Hadoop。本文研究了HDFS分布式
文章重点对黔东南州农民专业合作社“休眠”现象进行研究,结合相关理论基础,总结归纳农民专业合作社在发展的过程中出现“休眠”现象的原因。在认真分析国家政策、合作社实施机
以家具企业的职业岗位需求为逻辑的起点,通过对职业岗位中典型工作任务的分析,推理出所在职业岗位应具备的职业行动能力,进而推导出以职业行动能力为导向的学习领域,从而将学
全髋关节置换术后最常见的并发症是由无菌性松动引起的假体周围骨溶解。在该病理过程中,磨损颗粒被巨噬细胞吞噬并激活巨噬细胞和诱导其分化,最终导致骨吸收作用的发生。巨噬细
本文采集了教师与26位学习者的交际性交流语料,研究不同子类型的重铸促使学习者进行成功修正的有效性。实验表明,结合了提示的重铸子类型能更有效地引起学习者对语言错误的注
学习障碍学生的融合教育已引起广泛重视,融合教育能够帮助他们获得平等的学习机会。许多国家和地区都积极探索适合学习障碍学生的普通教育,早期介入是帮助他们融入普通教育中
随着社会老龄化的发展,心血管疾病的发病率和死亡率一直处于递增状态,现在已经超过肿瘤性疾病成为排名第一的疾病。房颤作为临床上最常见的心血管疾病,影响着50岁以上约5%的人口,也是脑卒中以及心律衰竭等重大心脏疾病的重要诱因。近年来,因为房颤信号的数字特征在心律失常药物效果判断、房颤辅助诊断以及颤动部位定位等方面展现了重要的临床价值,所以在房颤发生时,消除心室信号的干扰,提取房颤信号是帮助临床医生进一步
利用我国1953~1995年冬夏季平均最低气温(Tm)和平均最高气温(TM)资料,分析冬夏季TM、Tm距平场的年代际空间型态及其演变特征.指出冬夏季Tm、TM场的空间型态基本都在70年代末至80年代初发生显著变化,但空间型态
新形势下随着犯罪手段和形式越来越隐蔽化,足迹具有相对稳定性、特定性和反应性,使得足迹检验技术的发展和突破在侦查破案中也发挥着不可替代的作用,为公安机关案件侦查提供