研究背景纤毛是以微管为主要结构组成的亚细胞结构。纤毛结构或功能缺陷导致的人类疾病统称为“纤毛疾病”。Joubert综合征（Joubert syndrome,JBTS）是纤毛疾病的典型代表,是一种以小脑蚓部发育不良为主要临床特征的神经系统发育疾病,颅脑磁共振中的“磨牙征”是其诊断的重要标准。JBTS临床表现复杂多样,且尚无特殊治疗方法,部分患者可能累及视网膜、肾脏、肝脏并逐渐恶化。目前,该病已有40多个致病基因被报道,主要表现为常染色体隐性遗传或X连锁隐性遗传模式。探寻其分子病因对于该病的早诊断、早发现、缓解家庭和社会负担具有重要意义。研究目的通过多种基因检测手段对4个Joubert综合征患者及家系进行遗传学分析,明确患者的致病基因及变异位点,为该病的出生缺陷防控、遗传咨询及产前诊断提供科学的依据。方法在获得伦理批件和知情同意的前提下收集患者的临床资料并整理归纳,采集患者及家系成员的外周静脉血,提取基因组DNA/RNA展开分析研究。采用全外显子组测序（Whole Exome Sequencing,WES）技术对4例患者（137C、146C、162C、168C）的基因组DNA进行高通量测序,通过生物学信息分析筛选候选致病基因及变异位点,依照美国医学遗传学和基因组学学会（ACMG）的指南对变异位点进行解读,针对不同的突变类型选择不同的方法完成对患者及家系成员样本的验证和分析。采用Sanger测序验证家系的点突变;采用RT-PCR结合Sanger测序分析变异是否可导致异常剪接;采用Q-PCR技术确认拷贝数变异,用长片段PCR寻找拷贝数变异的断裂点位置。结果病例1:137C,男,JBTS患者,右足多趾,双眼睑下垂。WES及Sanger测序发现先证者ARMC9基因（NM025139.4）存在c.1878+1G＞A和c.485C＞G,p.Ser162*复合杂合变异,分别遗传自父母,其姐为c.485C＞G位点的携带者。RT-PCR实验证实c.1878+1G＞A变异导致20号外显子跳跃。病例2:146C,女,单纯型JBTS患者。第一轮WES分析结果仅发现KIAA0586基因（NM001244189.1）的已知致病性变异位点c.3303G＞A（遗传自母亲）。RT-PCR结果证实c.3303G＞A可导致23号外显子部分缺失,造成异常剪接,预测产生截短蛋白（p.Pro1084Lysfs*22）。拷贝数变异分析提示先证者及父的15号外显子杂合缺失,Q-PCR确认先证者及其父的15号外显子为单拷贝,并通过长片段PCR找到了断裂点,明确了缺失的具体位置为Chr14:g58926242-58927621,长度为1380 bp,包含14号内含子部分片段、15号外显子和15号内含子部分片段。病例3:162C,男,JBTS合并先天性黑矇患者。WES及Sanger测序分析发现先证者CEP290基因（NM025114.3）存在遗传自母亲的移码突变c.1666delA,p.Ile556Phefs*17和遗传自父亲的“临床意义未明”的同义突变c.3309G＞A,p.Glu1103Glu。c.3309G＞A位于第28号外显子最末位碱基,RT-PCR结果证实c.3309G＞A可导致28号外显子区跳跃,导致异常剪接,预测产生截短蛋白（p.Gly1035Alafs*18）。病例4:168C,男,JBTS患者,左手并指,双足多趾/并趾,上唇轻微缺刻,高腭。WES及Sanger测序分析发现先证者IFT74基因（NM025103.2）存在双等位基因变异c.535C＞G,p.Gln179Glu和c.305+1G＞A,分别遗传自父母。其中c.535C＞G,p.Gln179Glu与已报道的5例IFT74突变导致的JBTS病例中的错义突变相同且共享约305 kb的单体型,c.305+1G＞A经RT-PCR实验证明造成了 4号外显子跳跃,引起异常剪接,可导致翻译提前终止（p.Gly86Glufs*4）。结论本文报道了 1例AMRC9基因变异所致的JBTS病例,发现了 2个新的致病性位点;报道了国内第1例KIAA0586基因变异导致的JBTS病例,发现了 1个新的拷贝数变异;报道了 1例CEP290基因变异导致的JBTS合并先天性黑矇病例,发现了 1个新的同义突变导致异常剪接的位点;报道了世界第6例IFT74基因相关的JBTS病例,发现了 1个新的致病性变异位点,再一次证实了c.535C＞G位点的奠基者效应,进一步明确了IFT74突变与“磨牙征”、上唇轻微唇裂/缺刻、多指这一表型组合的对应关系。上述研究结果拓宽了 JBTS的突变谱,为患者家庭再生育和遗传咨询提供了重要的分子基础。同时也提示在JBTS分子遗传学研究中应对拷贝数变异以及特殊位置的同义突变导致异常剪接等特殊情况进行关注,以提高分子诊断的准确率。