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僵蚕是蚕蛾科昆虫家蚕(Bombyx mori)4-5龄幼虫感染(或人工接种)白僵菌(Beaueria bassiana(Bals)Vuill)而致死的干燥虫体,为传统的中药。僵蚕含灰份6.34%、蛋白质67.44%、水分11.31%、脂肪4.38%,据文献报道,僵蚕具有抗惊厥作用、抗凝、抗血栓、促纤溶、催眠作用、抗癌作用、降糖、降脂作用等作用。 本文综述了近年来对僵蚕的成分分析、药理学研究、酶法水解在中药提取中的应用的研究进展以及可视化优化方法的原理及应用,并主要研究了僵蚕的酶解工艺以及酶解以后水解度对分子量及其分布的影响,以期能在以后的药理学研究中获得更好的效果。 本课题主要做了以下三个方面的的工作: (1)首先用微量凯氏定氮法测定实验所采用的原料僵蚕的蛋白质含量,并以水解度为指标,采用单因素实验法考察水解时间、中性蛋白酶加入量、水解温度、pH值、激活剂CaCl2加入量对水解度的影响,得出各个单因素条件的最佳值。原料僵蚕的蛋白质含量测定的结果为53.25%,比文献报道的稍低。 (2)在单因素实验的基础上,采用L25(56)正交实验设计得出工艺条件各个最佳值,并对实验数据进行分析得出各个影响的因素的主次顺序为:温度的影响最大,其次是固液比,而后是水解时间、酶加入量和pH值,CaCl2的加入量影响较小。然后用可视化优化方法处理实验数据,对实验工艺条件进行预测得到最佳工艺条件为:酶加入量5%,CaCl2加入量4.5%,固液比1:5,pH值为6.2,水解时间7.3h,水解温度53.5℃。经验证实验验证后,证明用可视化优化方法处理实验数据预测所得到的工艺条件可信。 (3)在对水解以后的样品的分子量及其分布的研究中,采用质谱(MS)法进行测量。水解前的原料僵蚕的分子量主要分布在300-1500之间,含量比较大的几种物质的分子量主要在500左右,而且分布的比较集中;水解后的样品分子量主要分布在118.1-473.4之间;含量的最大的几种物质的分子量主要为118.1、205.1和279.1;以本实验水解得到多肽为活性肽,具有重要的生理功能。