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目的:探讨泛素(Ubiquitin)修饰乙肝病毒核心抗原肽(HBc Ag)经胞质转导肽(CTP)转导在HBV转基因小鼠体内诱导分泌Th1型细胞因子及HBV特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,并进一步验证融合蛋白Ub-HBcAg-CTP在转基因小鼠体内的抑制HBV病毒复制功能。方法:1.BALB/c-HBV转基因小鼠随机分为实验组Ub-HBc Ag-CTP(50μg),对照组HBc Ag-CTP(50μg)、Ub-HBc Ag(50μg)、IFN-a(20000IU)、HBcAg(50μg)及空白组(PBS)分别肌肉注射免疫转基因小鼠,每周1次,共免疫3次。通过酶联免疫吸附法(ELISA)、固相酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测T淋巴细胞分泌Th1细胞因子;流式细胞术(FCM)检测T淋巴细胞内的细胞因子;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测T淋巴细胞的杀伤活性。2.HBV转基因小鼠随机分为实验组Ub-HBc Ag-CTP(50μg),对照组HBcAg-CTP(50μg)、Ub-HBcAg(50μg)、IFN-a(20000IU)、HBc Ag(50μg)及空白组(PBS)经肌肉免疫小鼠,每周1次,共3次。分别于免疫过程中第2周及第4周对免疫小鼠行内眦取血,获取各组血清共2次,分别通过微粒子酶免疫分析法(MEIA)对2次小鼠血清行乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)水平检测,荧光定量聚合酶链反应(PCR)分别测定2次血清中HBV DNA水平,并用免疫生化检测末次血清的AST、ALT水平,同时对免疫后小鼠肝脏组织行HE染色及免疫组织化学检测肝组织中HBs Ag、HBcAg蛋白表达水平。结果:1.实验组融合蛋白Ub-HBcAg-CTP能有效诱导HBV转基因小鼠T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子;FCM检测实验组融合蛋白能有效增加特异性CTL数量,所诱导的CTL水平明显高于其他组;且Ub-HBc Ag-CTP融合蛋白诱导的T淋巴细胞CTL活性明显高于对照组及空白组(p值均<0.05)。2.Ub-HBc Ag-CTP融合蛋白免疫转基因小鼠后,实验组小鼠血清中HBsAg及HBV DNA水平较其他对照组均明显降低,表示Ub-HBcAg-CTP对转基因小鼠体内HBV水平有一定抑制作用,且Ub-HBcAg-CTP组小鼠血清中AST、ALT水平高于其他对照组(p值均<0.05)。同时实验组小鼠肝脏组织HE染色显示炎性细胞的数量明显增多,而免疫组化分析显示其肝组织中HBsAg、HBc Ag蛋白表达量明显减少。结论:强制泛素修饰抗原肽HBc Ag经CTP转导免疫HBV转基因小鼠,能够刺激小鼠体内T淋巴细胞分泌Th1型细胞因子(IL-2和IFN-γ)及有效提高体内特异性CTL的表达水平,同时能增强T淋巴细胞CTL活性。Ub-HBcAg-CTP融合蛋白免疫HBV转基因小鼠后能增加小鼠体内HBV特异性CTL数量,从而有效降低血清中HBsAg及HBV DNA水平,抑制病毒复制,同时增加ALT、AST表达水平,增强免疫小鼠肝脏组织内炎症反应,而抑制了肝脏中HBs Ag、HBc Ag蛋白的表达。