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本文通过脂肪酶的使用缩减罗非鱼皮脱脂时间从而优化酸溶性胶原蛋白提取的预处理工艺,分析、测定所提胶原蛋白的理化性质,并用所提胶原蛋白制备梯级胶原蛋白多肽,进而通过动物实验研究胶原蛋白及多肽对皮肤状况的改善效果。首先,通过预实验确定罗非鱼皮胶原蛋白提取工艺中的最耗时步骤为鱼皮脱脂工序。采用脂肪酶脱脂代替有机溶剂脱脂的方法,以缩短脱脂工艺时间。以脱脂率为指标,单因素实验确定影响脱脂率的显著因素为脂肪酶添加量、脱脂时间、脱脂温度;运用Box-Benhnken中心组合设计和响应面分析法优化脱脂条件,得出罗非鱼皮酶法脱脂的最优工艺参数为：pH 9、加酶量0.5%、脱脂温度39℃、脱脂时间56min,在此条件下鱼皮的脱脂率为63.71%。其次,采用上述脱脂工艺处理的罗非鱼皮,乳酸法提取胶原蛋白,并对其理化性质进行检验。实验结果显示,罗非鱼皮胶原蛋白在232 nm处出现最大吸收峰而在280 nm处没有强吸收峰,这与I型胶原蛋白的特征吸收一致；SDS-PAGE电泳图谱表明该胶原蛋白的肽链组成为α1,α2,β,电泳条带的位置表明胶原蛋白的三螺旋结构完整；通过热变性曲线得出罗非鱼皮胶原蛋白的热变性温度为32.7±0.25℃。结合理化性质检测的结果可知,脂肪酶法脱脂工艺可大大缩短鱼皮脱脂处理的时间,并且不会导致罗非鱼皮中的胶原蛋白理化特性或分子的改变。再次,利用胰蛋白酶和碱性蛋白酶复合,酶解胶原蛋白,制备分子量(Molecular weight,Mw)Mw<3000 Da、3000 Da<Mw<5000 Da、Mw>5000Da的罗非鱼皮胶原蛋白多肽。对梯级胶原蛋白多肽的含水量、总蛋白、灰分、纯度及平均分子量分布进行分析得知,各梯级多肽纯度约为85%,其中混有少量的水分、无机盐以及非胶原类蛋白。通过高效液相凝胶色谱对各级多肽进行检测,平均分子量均在所属分子量肽段内,可以用于动物皮肤涂抹实验。最后,在小鼠皮肤上连续涂抹胶原蛋白及各梯级胶原蛋白多肽45 d,通过测定小鼠皮肤角质层水含量、皮肤白度、皮肤组织形态状况的变化,分析涂抹物对小鼠皮肤的影响。结果显示,胶原蛋白及多肽对小鼠皮肤角质层含水量有明显的提高效果,胶原蛋白、中高分子量多肽对皮肤白度提升效果较好,对皮肤组织形态影响较小；而低分子量多肽对皮肤白度提升效果较差、对皮肤组织形态的影响更强。