乳腺癌(Breast cancer)是目前世界上第二大常见的恶性肿瘤,位居女性恶性肿瘤第一位。发病率占成人恶性肿瘤的3%,仅次于肺癌。2018年新增的乳腺癌病例超过200万例。尽管乳腺癌的早期筛查、手术治疗、放化疗、内分泌治疗以及分子靶向治疗已取得重大进展,但乳腺癌仍然是女性肿瘤死亡的重大疾病。所以,一直以来乳腺癌都是人们研究的热点。目前应用于乳腺癌治疗的药物因其可产生多药耐药性、毒副作用严重、费用高昂等原因,给患者及其家庭带来极大苦恼,甚至使得治疗失败,从而造成可治愈率的降低。因此,开发新型的乳腺癌抗肿瘤治疗方法的研究仍具有较为广阔的应用前景。干扰素-γ(IFN-γ)是一种多效性的细胞因子,属于Ⅱ型干扰素,编码于12号染色体上。IFN-γ是由两个17 kDa多肽亚基以非共价键结合形成的同二聚体结构。在合成过程中,经过多次n-糖基化,形成一个成熟的50kda分子。主要由激活的T细胞包括Th0、TH1细胞和几乎所有的CD8~+细胞毒性T细胞和自然杀伤(NK)细胞分泌。具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多效性功能,有助于形成先天和适应性免疫反应。有文献报道干扰素-γ可以上调多种实体肿瘤细胞表面MHC-Ⅰ类分子(人体中为HLA-A、HLA-B、HLA-C),提高肿瘤细胞的免疫原性,从而提高机体的免疫监视能力,发挥抗肿瘤的作用。NLRC-5属于NOD样受体(NLRs)家族成员,是存在于细胞内的主要模式识别受体,可以诱导固有免疫反应。有文献报道在淋巴细胞、宫颈癌细胞、纤维母细胞、骨髓细胞中干扰素-γ可上调NLRC-5的表达,同时有研究发现,在小鼠模型中NLRC-5可上调的MHC-Ⅰ的表达。但是此种作用在乳腺癌细胞中还未得到明确证实,干扰素-γ对乳腺癌细胞MHC-Ⅰ类分子的作用及机制还需要进行进一步的深入探讨。基于此,本研究拟应用乳腺癌SKBR3细胞,探讨干扰素-γ对乳腺癌细胞的MHC-Ⅰ类分子的作用及其机制。目的:研究干扰素-γ(IFN-γ)对乳腺癌细胞的MHC-Ⅰ类分子表达的影响,并深入探讨其对MHC-Ⅰ类分子表达的调控机制。为干扰素-γ在乳腺癌临床治疗中的开发应用提供实验依据。方法:1.体外培养人乳腺癌SKBR3细胞株,根据IFN-γ浓度将其分为25U/ml、50 U/ml、100 U/ml组,未加药组为空白对照组。2.采用流式细胞术检测经不同浓度干扰素-γ作用24h后的各组乳腺癌SKBR3细胞表面的HLA-ABC类抗原的表达。3.各组加入干扰素-γ后,24h后终止培养,分别提取各组总蛋白,采用western blotting法检测各组HLA-A、HLA-B、HLA-C、NLRC-5蛋白相对表达变化。4.细胞处理24h后终止培养,采用RT-qPCR法检测细胞中HLA-AB C、HLA-A、HLA-B、HLA-C、NLRC-5的mRNA相对表达变化。结果:1.流式细胞仪检测乳腺癌SKBR3细胞表面HLA-ABC表达情况流式细胞术结果显示,空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-ABC蛋白表达量为(14.80±2.86)、(44.50±3.57)、(48.73±2.59)、(56.77±1.93),三个实验组的HLA-ABC蛋白表达量均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.实时荧光定量PCR法检测HLA-ABC、HLA-A、HLA-B、HLA-C、NLRC-5的mRNA相对表达情况。RT-qPCR结果显示:(1)HLA-ABC的mRNA表达情况:空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞HLA-ABC mRNA表达量为(1.00±0.00)、(2.26±0.54)、(3.89±0.81)、(5.94±0.98),三个实验组表达量均升高,除25 U/ml组外,其余浓度组均与空白对照组差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性;(2)HLA-A的mRNA表达情况:空白对照组、25 U/ml、50U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-A mRNA表达量为(1.00±0.00)、(3.31±0.84)、(5.32±1.25)、(8.69±1.13),三个浓度组均较空白对照组表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性;(3)HLA-B的mRNA表达情况:空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-B mRNA表达量为(1.00±0.00)、(6.28±0.31)、(12.51±1.77)、(17.69±2.79),三个浓度组均较空白对照组表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)且有浓度依赖性;(4)HLA-C的mRNA表达情况:空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞表面HLA-C mRNA表达量为(1.00±0.00)、(2.56±0.52)、(4.09±0.98)、(6.82±0.23),三个浓度组均较空白对照组表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性;(5)NLRC-5的mRNA表达情况:空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞NLRC-5 mRNA表达量为(1.00±0.00)、(2.56±0.88)、(4.57±0.72)、(7.58±1.00),三个浓度组均较空白对照组表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性。3.Western Blot法检测SKBR3细胞HLA-A、HLA-B、HLA-C、NLRC-5蛋白的表达情况,结果显示:(1)HLA-A蛋白表达情况:空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞HLA-A的蛋白表达量分别为(0.07±0.01)、(0.80±0.02)、(1.45±0.06)、(2.02±0.16),三个加药组较空白对照组HLA-A蛋白的表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性。(2)HLA-B蛋白表达情况:空白对照组、25 U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞HLA-B的蛋白表达量分别为(0.19±0.04)、(0.68±0.07)、(0.90±0.11)、(1.12±0.05),三个加药组较空白对照组HLA-B蛋白的表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性。(3)HLA-C蛋白表达情况:空白对照组、25U/ml、50U/ml、100U/ml组细胞HLA-C的蛋白表达量分别为(0.12±0.05)、(0.52±0.19)、(0.81±0.14)、(1.21±0.10),三个加药组较空白对照组HLA-C蛋白的表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性。(4)NLRC-5蛋白表达情况:空白对照组、25U/ml、50 U/ml、100 U/ml组细胞NLRC-5的蛋白表达量分别为(0.19±0.09)、(0.37±0.06)、(0.51±0.05)、(0.75±0.07),三个浓度组较空白对照组表达量均升高,差异有统计学意义(P<0.05),且有浓度依赖性。结论:1.干扰素-γ可上调乳腺癌SKBR3细胞的MHC-Ⅰ类分子的表达。提高乳腺癌SKBR3细胞的免疫原性。2.干扰素-γ上调NLRC-5的表达,可能是干扰素-γ上调乳腺癌SKBR3细胞的MHC-Ⅰ类分子表达机制之一。可为乳腺癌患者治疗提供潜在治疗策略。