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本研究从豌豆种子中分离并鉴定了一个生物活性肽,由于其氨基端为丙氨酸(Alanine),羧基端为甘氨酸(Glycine),因而将该生物活性肽命名为aglycin。Aglycin链长为37个氨基酸,链内具有六个半胱氨酸,依次为链内的第3、7、15、20、22和32位的氨基酸。经飞行时间质谱(MALDI-TOF-MASS)鉴定,aglycin的分子量为3742.3Da,与理论计算的分子量3743.4Da一致。表面等离子体共振光学传感器(surface plasmon resonance biosensor)实验表明,哺乳动物胰腺细胞膜上存在能够与aglycin相互作用的蛋白,进而将aglycin与溴化氢激活的Sepharose 4B偶联,采用亲和层析的方法将此相互作用蛋白从猪胰腺细胞膜上纯化出来,ELISA实验证明纯化的蛋白能够在体外与aglycin再结合。纯化出的相互作用蛋白用SDS-PAGE分离并经考马斯亮蓝R-250染色后,再切下染色的蛋白条带直接进行胶内胰酶水解,所得的水解液经MALDI-TOF-MASS鉴定后获得这个膜相互作用蛋白的肽指纹图谱。依据肽指纹图谱在蛋白质数据库(http://www.matrixscience.com)中用Mascot Search查询后证实,这个与aglycin相互作用的蛋白是一个电压依赖性的阴离子通道蛋白,分子量为30737Da。体外酶学实验证明,aglycin及其在豌豆种子的各种异体形式都抗胃蛋白酶的水解,对热有高稳定性,这可能与它在高级结构上具有胱氨酸结的结构域有关。我们用正常昆明小白鼠、II型糖尿病模型鼠(KK/upj-Ay)和自己用链脲佐菌素(streptozotocin )制备的I型糖尿病模型鼠研究了aglycin对糖代谢的影响,发现aglycin具有调节糖代谢的作用。经皮下注射后,当注射剂量为2.5ug/g时,aglycin对正常昆明小白鼠、I型和II型糖尿病模型鼠的葡萄糖水平没有明显影响。当注射剂量达到5ug/g时,aglycin能显著提高正常昆明小白鼠和II型糖尿病模型鼠的血浆葡萄糖浓度,但对I型糖尿病模型鼠的血浆葡萄糖浓度没有显著影响,这可能与I型糖尿病模型鼠的胰腺组织受到链脲佐菌素的严重破坏有关。aglycin相互作用蛋白的鉴定及其对糖代谢影响的试验结果表明,aglycin可能是通过胰腺细胞膜上的电压依赖性的阴离子通道来影响葡萄糖代谢的。总的来说,本论文有以下四个主要研究结果:分离并鉴定了aglyicn,确定了大量制备aglyicn的工艺;从哺乳动物的胰腺组织中分离出aglyicn的相互作用蛋白,并鉴定为一个电压依赖性的阴离子通道;证实了aglycin抗酶降解、耐热,生理活性稳定。发现了aglycin能影响哺乳动物的糖代谢的新功能。本论文的创新点在于在哺乳动物中找到了aglyicn的相互作用蛋白并发现了aglycin新的生物学功能。