胸腺素β4对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成和CTGF表达的影响

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目的:拟通过观察人增生性瘢痕成纤维细胞(hypertrophicscar fibroblasts HSFB)经胸腺素β4(thymosin beta4)干预后,检测其Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的生成水平及表达结缔组织生长因子(connective tissue growth factor CTGF)的变化,以期了解胸腺素β4在病理性瘢痕发病中的作用机制。方法:标本来自本院整形科的患者(伤后半年内),采用组织块消化法培养细胞。成纤维细胞培养至3-6代细胞后进行实验,共分成5组,其中空白对照组,加入无血清的培养基;实验组:加入不同浓度的胸腺素β4(0.05、0.1、1、5μg/mL)无血清培养基作用培养6小时。(1)采用ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的含量;(2)通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法观察结缔组织生长因子(CTGF)mRNA的表达;(3)采用蛋白印迹法(Western blot)观测CTGF蛋白的表达。结果:(1)各实验浓度的胸腺素β4作用6小时后Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白分泌的值为:5μg/ml组(0.111±0.004、0.112±0.010),1μg/ml组(0.113±0.005、0.140±0.030),0.1μg/ml组(0.114±0.006、0.178±0.010),0.05μg/ml组(0.117±0.004、0.190±0.016),空白组(0.154±0.105,0.222±0.003),各实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结果显示,各实验浓度胸腺素β4作用后增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的分泌量减少。(2)各实验浓度的胸腺素β4作用6小时后(CTGF)mRNA表达灰度比值为:5μg/ml组(0.556±0.050),1μg/ml组(0.638±0.038),0.1μg/ml组(0.730±0.026),0.05μg/ml组(0.873±0.035),空白组(1.132±0.074),各实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结果显示,各实验浓度(0.05、0.1、1、5μg/mL)胸腺素β4作用后增生性瘢痕成纤维细胞CTGFmRNA表达降低。(3)各实验浓度的胸腺素β4作用6小时后(CTGF)蛋白表达灰度比值为:5μg/ml组(0.510±0.044),1μg/ml组(0.532±0.026),0.1μg/ml组(0.658±0.032),0.05μg/ml组(0.743±0.035),空白组(0.953±0.040),各实验组与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结果显示,各实验浓度(0.05、0.1、1、5μg/mL)胸腺素β4作用后均可以引起增生性瘢痕成纤维细胞CTGF蛋白表达降低。结论:胸腺素β4能剂量依赖性地降低增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌及结缔组织生长因子(CTGF)的表达。我们推认:胸腺素β4可能是通过这条途径来影响瘢痕生成。
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