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新城疫(Newcastle disease,ND)是一种由副粘病毒科新城疫病毒(Newcastle diseas virus,NDV)引起的禽类致死性传染病,该病具有发病急、死亡率高等特点,严重危害了我国养禽业。F蛋白是NDV的主要保护性抗原之一,可以诱导机体产生中和性抗体,并在机体免疫中发挥重要作用;而HN蛋白是NDV的另一保护性抗原,同样可以对机体起到一定的保护作用。然而在不同表达系统中,F与HN蛋白对机体的免疫保护率却不尽相同。因此,选择合适的抗原基因来对机体进行免疫显得至关重要。本研究以新城疫病毒Lasota株的F及HN为目的基因,将二者分别插入带有CMV启动子及VSV-GED、WPRE、ITRs等不同调控元件的假型化杆状病毒与未经改造的杆状病毒基因转移载体中,通过Bac-to-Bac表达系统获得重组Bacmid DNA,将其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒;利用高滴度重组杆状病毒侵染鸡胚成纤维细胞,通过SDS-PAGE和Western blotting比较不同抗原基因在禽类细胞中的表达水平;同时利用获得的重组杆状病毒直接作为疫苗进行免疫,比较分析带有不同调控元件及不同抗原基因的重组杆状病毒表达效果及免疫效果的差异。研究结果表明,利用SDS-PAGE和Western-blotting可成功检测到F与HN蛋白的表达。在目的蛋白表达量上,添加调控元件WPRE与VSV-GED的重组杆状病毒高于未添加调控元件的重组杆状病毒。其中BV-LM-F、BV-LM-ITRs-F的蛋白表达量为对照组BV-LM(-)-F的3.45倍和3.62倍;BV-LM-HN、BV-LM-I(?)蛋白表达量为相应对照组BV-LM(-)-HN的3.99倍和4.60倍。而含有相同表达载体,但目的基因不同的重组杆状病毒,在F与HN蛋白的表达量上无明显差异。间接免疫荧光试验结果表明:VSV-GED蛋白能够在Sf9昆虫细胞中成功表达,并具有表面展示作用,可增强杆状病毒的转导效率。以6个重组杆状病毒和商品化疫苗作为试验组,并设置空载体对照组和PBS对照组,分别免疫接种14日龄SPF鸡。免疫试验结果显示:F、HN系列重组杆状病毒疫苗血清抗体水平显著高于PBS对照组和空载体组(P<0.05),其中血清中和试验F系列抗体效价最高可达1:1387.47,与F和HN共免疫组(1:1272.59)无显著差异,与HN系列(1:764.56)和对照组(1:9.37)差异显著;ELISA检测IgG抗体水平,在免疫第56天,血清IgG抗体水平依次为:Lasota弱毒苗组>F系列疫苗组≈F与HN共免疫组>HN系列疫苗组>对照组,且以pLM、pLM-ITRs为载体的疫苗组均高于以pLM(-)为载体的疫苗组,说明调控元件WPRE与VSV-GED对提高抗原基因的表达水平有一定的作用;ELISA试剂盒检测免疫鸡血清IFN-y、IL-2及IL-4试验表明:重组杆状病毒疫苗能够刺激鸡体产生较强的体液免疫应答及细胞免疫应答,产生高水平的IFN-γ、IL-2及IL-4,各重组杆状病毒疫苗免疫组中IFN-y含量最高可达69.65 ng/mL,IL-2含量最高可达71.26 ng/mL,IL-4含量最高可达131.93 ng/mL;同时ITRs元件可以有效延长细胞因子在体内的表达时间。攻毒试验结果表明:F系列、HN系列与商品化疫苗对鸡只均有一定的保护作用,其中F系列疫苗的免疫保护率平均达95.8%;HN系列疫苗的免疫保护率平均达75.0%,与免疫保护率仅为12.5%的对照组差异显著。本研究将为筛选确定更有效的NDV保护性抗原基因及确定NDV保护性抗原基因的最优表达载体的研究奠定基础,同时为研制新型新城疫疫苗开创了新思路。