类风湿关节炎滑膜增生与细胞凋亡的研究

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细胞凋亡是生物界普遍存在的细胞生理性死亡过程,细胞的增殖与凋亡相互平衡以维持细胞正常的生理功能和数量的稳定。细胞凋亡在免疫系统中发挥非常重要的作用,参与胸腺细胞的阳性和阴性选择,调节细胞因子的产生等,如细胞凋亡紊乱,就可引起疾病的发生。 类风湿关节炎(RA)是典型的自身免疫性疾病,其病理特征为滑膜增生,细胞数增多,已证明这种病理机制与滑膜细胞原位增殖过快及细胞因子的作用有关。有试验表明这种增生与细胞凋亡异常有关。 本文应用基因重组技术构建细胞凋亡相关基因Fas、Fas L及bcl-2重组质粒,以体外转录的方法,用地高辛标记RNA,进而使用原位杂交方法检测RA,骨性关节炎(OA)及正常滑膜组织中Fas、Fas L及bcl-2 mRNA的表达。发现7例RA病人滑膜衬里层细胞中有6例Fas mRNA表达,5例bcl-2表达,且伴随Fas共同表达。在RA中Fas和bcl-2的表达率较OA及正常对照组(NC)明显增高(p<0.05),而FasL在三组滑膜衬里层细胞内均不表达。免疫组化证明所有表达mRNA的基因均可翻译成相应的蛋白质。HE染色显示7例RA滑膜层增厚,细胞增多,衬里层细胞可达5~10层,其下层有大量淋巴细胞浸润。而OA衬里层有2~5层细胞组成。电镜观察发现RA滑膜组织内凋亡的细胞很少,在所观察400个细胞中仅有一个细胞为凋亡早期的细胞。6例RA病人滑膜组织内未见DNA断裂成为典型的DNA梯形区带(DNA ladder),而4例OA病人中有1例的DNA发生断裂。流式细胞仪分析表明RA和OA病人体外培养的滑膜细胞自发凋亡的细胞数较少,均小于5%。光镜及分子生物学方法证实抗Fas抗体以浓度依赖方式在体外诱导Fas~+的滑膜细胞凋亡,细胞表面Fas蛋白的量与凋亡信号的强弱有关。
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