【摘 要】
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精准表征纤维素酶与底物有效吸附,是优化预处理条件,探究纤维素酶促水解反应机理的重要前提。本论文利用毕赤酵母异源表达、制备纤维素酶荧光探针;明确了纤维素酶荧光探针的吸附条件;考察了不同细胞壁与纤维素酶吸附特点。主要结果如下:（1）构建了3种重组质粒,并在毕赤酵母中异源表达,获得重组菌株,发酵8天时,Cel7A-M酶活为0.21 U/m L,Cel5A-G酶活为0.41 U/m L,BglⅠ-B酶活为
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精准表征纤维素酶与底物有效吸附,是优化预处理条件,探究纤维素酶促水解反应机理的重要前提。本论文利用毕赤酵母异源表达、制备纤维素酶荧光探针;明确了纤维素酶荧光探针的吸附条件;考察了不同细胞壁与纤维素酶吸附特点。主要结果如下:（1）构建了3种重组质粒,并在毕赤酵母中异源表达,获得重组菌株,发酵8天时,Cel7A-M酶活为0.21 U/m L,Cel5A-G酶活为0.41 U/m L,BglⅠ-B酶活为2.08 U/m L。Cel7A-M分子量约为80 k Da,Cel5A-G分子量约为70k Da,BglⅠ-B分子量约为106 k Da。构建的纤维素酶荧光探针能够成功吸附到纤维素底物。（2）Cel7A-M、Cel5A-G和BglⅠ-B荧光的最佳激发波长分别为573 nm、469 nm和385 nm,最佳发射波长分别为613 nm、511 nm和447 nm。（3）滤纸为底物,Cel7A-M最佳吸附浓度、吸附时间和观察时间分别为0.058 U/m L、7 min和2 min以内,Cel5A-G最佳吸附浓度、吸附时间和观察时间分别0.193 U/m L、7 min和12 s以内,BglⅠ-B最佳吸附浓度、吸附时间和观察时间分别1.933 U/m L、6 min和12s以内。（4）不同组织对纤维素酶荧光探针吸附能力不同,厚壁组织（ST）＞维管组织（VT）＞薄壁组织（PT）;纤维素酶荧光探针能够清晰反映预处理效果。
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