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本试验以健康无病的10只比利时兔为材料,分别从兔肌肉、大脑和肝组织中提取总RNA。根据GenBank中已发表的人、小鼠、牛、大鼠的MT1,MT2和MT3基因的CDS区序列设计引物,通过RT-PCR和克隆技术分别克隆出兔MT1,MT2和MT3基因的CDS全序列。MT1,MT2和MT3基因CDS区序列分别全长186bp、186bp和201bp,编码61、61和66个氨基酸。MT1,MT2和MT3基因之间的核苷酸同源性为82.42%,氨基酸同源性为78.28%。其中MT1和MT2基因核苷酸同源性为89.59%,氨基酸同源性为81.97%；MT2与MT3基因核苷酸同源性为76.27%,氨基酸同源性为63.64%；MT1与MT3基因核苷酸同源性为75%,氨基酸同源性为66.67%。通过核苷酸序列分析结果显示兔MT1基因与狗、人、大鼠和小鼠的同源性较高；兔MT2基因与人、大鼠、小鼠和猩猩的同源性较高；兔MT3基因与牛、狗、人、大鼠、野猪、小鼠和绵羊的同源性较高。对包括兔在内的不同哺乳动物MT1,MT2和MT3氨基酸序列构建NJ系统进化树。对兔MT1,MT2和MT3基因进行生物信息学分析,预测出其编码蛋白分子量分别约为6.8kDa、7.2 kDa和14.25kDa、等电点分别为5.12、5.34和5.32。兔MT1存在5个疏水区、3个潜在的磷酸化位点、存在10个可能二硫键以维持其立体结构。兔MT2存在5个疏水区、2个潜在磷酸化位点、存在10个可能二硫键以维持其立体结构。兔MT3存在1个潜在的N-糖基化位点199处、1个主要的疏水区、2个潜在的磷酸化位点、存在可能的10个二硫键以维持其立体结构；通过二级结构预测,发现兔MT1的二级结构由59个氨基酸残基组成的无规则卷曲形成,占96.72%；MT2的二级结构有58个氨基酸残基形成无规则卷曲和3个氨基酸残基形成延伸链,分别占95.08%和4.92%；MT3的二级结构是以1个a-螺旋为基础的,a螺旋由6个氨基酸残基形成,占9.09%；螺旋之间为无规则卷曲,‘由54个氨基酸残基形成,占81.82%。将兔MT2基因的编码序列构建到表达载体pET-32a上,pET-32a-MT2在大肠杆BL21(DE3)中进行原核表达,发现MT2蛋白与pET-32a上Trx,His和S标签序列形成大小为27kDa左右的融合蛋白,该结果并于预期的结果一致。对融合蛋白表达条件进行优化,发现最佳诱导浓度为0.6 mmol,最佳诱导时间为8h。通过对融合蛋白可溶性分析发现该蛋白具有包涵体形式和分泌蛋白形式。