Cbl-b在丙型肝炎患者T细胞失能中的作用机制研究

来源 :第四军医大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:hoooopy
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
根据世界卫生组织2010年的数据,全球大约有1.7亿人感染了丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus, HCV)。感染HCV后,约有75-85%的患者进展为慢性肝炎。其中至少20%的感染者在未来20年内发展为肝硬化或肝癌[1]。在欧洲和南美洲,20-30%的肝移植患者是因感染HCV感所致[2]。目前尚无有效的HCV疫苗,注射干扰素加口服利巴韦林等治疗措施的有效性也只有50%左右,且会出现各种副作用,更重要的是我们尚未明确HCV的逃逸致病机制[3]。因此,我们必须尽可能的将其研究清楚,以便我们制定出更加有效的治疗方案。趋化因子是一类小分子分泌性蛋白质,可吸引中性粒细胞、单核/巨噬细胞等炎性细胞移动到炎症部位,增强炎性细胞的吞噬杀伤功能,参与免疫调节和病理损伤。趋化因子C-X-C配体(chemokine C-X-C ligand, CXCL)属α趋化因子,其结构中含有保守的半胱-X-半胱(C-X-C)基序,主要激发中性粒细胞趋化性。其中,CXCL9又称为“γ干扰素诱导的单核细胞因子(monokine induced by gamma interferon,MIG)”,是T细胞趋化因子;CXCL11又称为“干扰素诱导的T细胞α趋化因子(Interferon-inducible T-cell alpha chemoattractant, I-TAC)”,结合CXCR3,对活化的T细胞、中性粒细胞和单核细胞发挥趋化作用。研究发现HCV患者血清中趋化因子CXCL9、CXCL11水平升高,可与T细胞上受体CXCR3结合后,有助于将T细胞募集至HCV病毒感染部位,发挥细胞免疫应答,有助于清除HCV病毒;且有研究证实,慢性肝炎患者CD4+T和CD8+T细胞高表达组织归巢受体(CD161),与趋化因子受体水平呈正相关,也进一步证实T细胞被趋化因子募集至肝脏。然而仍有75-85%HCV感染者发生慢性化,提示募集至肝脏中的T细胞没有发挥有效的免疫应答,将HCV病毒清除;一系列研究证实HCV感染者T细胞处于失能状态,导致T细胞失能的因素有多种,近期大量研究发现E3泛素连接酶Cbl-b是近年发现的首个直接参与T细胞活化和耐受的E3泛素连接酶。在很多感染性疾病中Cbl-b都发挥负调控作用,而目前尚未见有关Cbl-b在慢性丙型肝炎中的相关报道。因此,本实验拟通过探索Cbl-b在T细胞失能中的作用及规律,进一步阐明HCV感染时T细胞失能的机制,为抗HCV治疗提供新的思路和方法。1.血清趋化因子CXCL9和CXCL11的检测采取健康人和丙肝患者全血,2h内进行处理,吸取上层血清标本冻存于-80℃超低温冰箱中备用。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清CXCL9和CXCL11。2.外周血Cbl-b、CD28和CTLA-4的表达的检测采取健康者和患者的外周血,分离出外周血单个核细胞(PBMC),将细胞调至5×106个/mL,参照美国Invitrogen公司的Trizol试剂说明提取总的RNA并定量。用1gRNA反转录,再加入引物用PCR试剂盒扩增目的基因。3.Cbl-b腺病毒载体的构建和包装将Cbl-b基因定向插入到腺病毒穿梭质粒pAV.EX1d-CMV中,获得重组质粒pAV.Ex1d-CMV>CBL-B/IRES/EGFP,再转染HEK293细胞,包装腺病毒表达载体。用不同方法检测腺病毒载体。通过酶切、PCR及测序对穿梭质粒进行了鉴定。结果:1.健康对照组血清CXCL9、CXCL11的浓度低于慢性丙型肝炎组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。在慢性丙型肝炎组内,CXCL9和CXCL11的水平在不同HCV1b基因型组和2a基因型组之间无显著差异。CXCL9和CXCL11浓度与血清ALT水平无相关性,与HCV RNA载量也无相关性。2.Cbl-b、CD28和CTLA-4mRNA在慢性丙型肝炎患者中较健康对照组表达升高,其中CTLA-4的升高表达具有统计学意义;在HCV lb基因型中,Cbl-b和CTLA-4mRNA水平较HCV2a基因型显著升高,差异具有统计学意义,而这三个分子与HCVRNA和ALT水平均无显著统计学意义。3.经酶切及PCR鉴定,Cbl-b腺病毒载体构建成功,进一步研究Clb-b在HCV感染中的作用机制奠定了基础。综上所述,Cbl-b在丙型肝炎患者T细胞失能中可能起到了负性调节作用,具体机制仍需进一步的研究和探索。
其他文献
BOT项目在特定时期有力助推了高校的发展,但它也给高校后勤管理带来了一定的困难。地方本科院校应正视BOT项目在新形势下出现的问题,认识理顺关系、规范管理、求同存异、回购
以丁香提取液为原料,应用于脐橙采后贮藏保鲜试验.采用0,2%,3%,4%的丁香提取液浸泡脐橙后贮藏,定期检测相关指标.结果表明2%,3%和4%质量分数的丁香提取液均能有效减少脐橙的
从温家宝总理2005年签署第443号国务院令,公布《直销管理条例》,距今已四年。在直销业大力发展的势头之下,比较研究中西方两大代表性直销公司激励机制对学术界、直销行业、商
舞蹈教学中的游戏移情教学法,就是通过游戏化、生活化、情节化的教学,将孩子的兴趣激发,把舞蹈的基本动作、作品情感进行转化,使孩子成为积极主动地参与者,在不知不觉中,自觉主动地
2014年之后的实体书业市场开始回暖,但实体书店营销仍困难重重,在新的消费环境下,传统的消费者购买决策已经不再适用。本文分析了实体书店消费者购买决策的变化,据此提出实体
介绍了有机硅建筑防水材料的性能及近年来国内外的应用研究进展
优美的琴声给学习钢琴的幼儿带来了快乐,激起了他们学琴的欲望,但这种兴趣非常容易产生转移,所以教师在教授幼儿正确的原则和技巧同时,应全面培养幼儿学习钢琴的兴趣,使幼儿
利用野外露头、有机地球化学及钻井资料,分析中扬子区寒武—志留系页岩气资源勘探远景。研究表明,中扬子区上震旦统—志留系页岩主要以上震旦统陡山沱组、下寒武统水井沱组(
Moodle架设和性能优化是Moodle应用难点。先给出了WAMP开源平台架设方案,然后给出了简体中文Moodle 1.9.10+系统架设和性能优化方法,最后对Moodle架设进行了实践检验,是Moodl
目的了解影响医生对手术室护理工作满意度的因素,提出干预措施.方法采用自制满意度调查表,对45名外科医生进行满意度调查,将调查表中医生对护理工作有意见的因素进行分析,制