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酿酒酵母细胞中Rim101是一个具有锌指结构的转录因子,在调控酿酒酵母细胞耐受碱性和高盐环境,钙离子稳态,细胞分裂以及硒毒性方面起作用。完善Rim101调控系统使酿酒酵母细胞适应碱性条件的分子机制更加清楚。剪切形式并定位在细胞核中的Rim101才是有功能的蛋白,Rim101的亚细胞定位和其功能相关。细胞周期依赖性激酶Pho85的基因缺失,导致Rim101蛋白在细胞核内积累。为了探索Rim101亚细胞定位的新调节因子,本课题通过荧光显微镜技术对酿酒酵母细胞基因组中编码磷酸酶的73个非必需基因缺失株以及编码激酶的139个非必需基因缺失株进行了筛选,发现编码磷脂酰肌醇磷酸(Ptd InsP)的磷酸酶Sac1调控Rim101的亚细胞定位。进一步研究发现SAC1基因的缺失导致细胞质中游离钙离子的积累,使钙/钙调磷酸酯酶信号加强,导致编码Na+-ATP酶的基因ENA1转录水平升高。基因缺失株sac1能够表现出锂离子敏感性,并且在导入有Rim101组成型活性的质粒pHAC111-Rim101-531后能够部分抑制锂离子敏感性。同时,免疫印迹分析表明,基因缺失株sac1中3HA-Rim101的剪切情况与野生型相比没有明显不同。除此以外,基因缺失株sac1中Nrg1-HA融合蛋白的表达量和野生型相比相似。这些结果表明SAC1基因的缺失导致未剪切形式Rim101的核积累,Sac1可能对有功能Rim101的形成起到一个负调控的作用。为了了解磷酸酶或激酶相关基因的缺失是否影响Rim101的功能,本课题检测了所有基因缺失株的锂离子敏感性。发现9个与磷酸酶和13个与激酶相关的基因缺失株对0.4 mol?L-1 LiCl敏感。其中与磷酸酶相关的6个基因缺失株bud14、rts1、ptp3、inp51、siw14、oca1以及与激酶相关的6个基因缺失株cka2、yck1、sat4、lcb3、hal5、ipk1在导入有Rim101组成型活性的质粒pHAC111-Rim101-531后能够抑制锂离子的敏感性。进一步研究证明,这12个基因缺失株中,与野生型相比ENA1-LacZ表达水平降低的有6个基因缺失株siw14、rts1、oca1、ipk1、lcb3和hal5,其它基因缺失株中ENA1-LacZ的表达水平与野生型中ENA1-Lac Z的表达水平相似甚至高于野生型中ENA1-LacZ的表达水平。说明这些磷酸酶或激酶通过不同的机制调控Rim101途径和锂离子耐受性。