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目的:了解在免疫受损小鼠侵袭性肺曲菌病模型肺组织中NOD2表达的改变,并进一步研究其NOD2在小鼠巨噬细胞RAW264.7抗曲菌免疫中的作用。方法:(1)采用环磷酰胺腹腔注射的方法造成小鼠粒细胞缺乏,经鼻滴入烟曲菌孢子,建立小鼠侵袭性肺曲菌病模型,检测感染前后肺组织中NOD2和RIP2基因表达情况;(2)合成针对小鼠NOD2的三条siRNA序列及阴性对照序列,转染RAW264.7细胞,通过实时荧光PCR方法及western blot方法检测基因沉默效果,筛选出有效序列;(3)以筛选出的有效siRNA序列转染RAW264.7细胞,设置正常RAW264.7细胞做对照,分别以底液、MDP、Af、MDP+Af刺激两组细胞,并观察24h、48h、72h,收集细胞和上清,检测NOD2和RIP2基因及其蛋白的表达情况、NF-κB蛋白表达情况和上清液TNF-α、IL-8的变化。结果:(1)免疫受损小鼠接种烟曲菌后肺部病理切片显示明显的充血、水肿、中性粒细胞浸润并形成多发病灶,六胺银染色可见孢子生发成菌丝并呈多发集落分布,至18～48小时最为显著,提示侵袭性肺曲菌病小鼠建模成功,而对照组炎症反应轻于免疫受损小鼠,未见到菌丝和孢子聚集的现象;(2)两组小鼠在接种烟曲菌孢子后,肺组织中NOD2的mRNA表达进行性升高,与接种前有显著差别(P＜0.05),至72小时达到观察期间的最高峰,免疫受损组小鼠在接种后24h、48h高于正常组小鼠(P＜0.05);小鼠肺组织中RIP2基因的表达也呈进行性升高,72小时达高峰,与接种前比较有显著差异(P＜0.05),但在不同时间点,两组小鼠之间RIP2无明显差别;(3)设计并合成三条针对小鼠NOD2的siRNA,转染入RAW264.7细胞中,24h后测定NOD2的mRNA和蛋白表达情况,与转染阴性对照序列的细胞相比,序列3对NOD2 mRNA和蛋白表达的抑制率分别达到96%和80%(P＜0.05),达到预定的基因沉默效果;(4)RAW264.7细胞在转染siRNA序列后24小时、48小时、72小时,NOD2 mRNA表达都被显著抑制(与对照组相比,P＜0.05);(5)以MDP刺激正常RAW264.7细胞,与仅加入等体积底液的对照组相比,NOD2 mRNA和蛋白的表达、RIP2 mRNA和蛋白的表达、NF-κB的蛋白表达以及细胞上清液中IL-8和TNF-α的含量均明显增加(P＜0.05);以Af、MDP+Af刺激有相似的上调表现(P＜0.05),其中MDP+Af组升高最为显著(P＜0.05);(6)经siRNA序列3转染的RAW264.7细胞,接受Af、MDP+Af刺激后,NOD2和RIP2的mRNA与不接受刺激的细胞相比升高且有统计学意义(P＜0.05),单纯以MDP刺激,差别无统计学意义;与接受同样刺激的正常RAW264.7细胞相比,NOD2和RIP2 mRNA的表达受到明显抑制(P＜0.05);(7)经RNA干扰的RAW264.7细胞,接受Af、MDP+Af刺激后,各时间点,NF-κB蛋白的表达与未接受刺激的细胞相比,无明显差别;(8)经RNA干扰的RAW264.7细胞,于各时间点TNF-α和IL-8的表达与正常的RAW264.7细胞相比明显减少(P＜0.05);分别接受MDP、Af、Af+MDP刺激后,TNF-α和IL-8含量与不接受刺激的对照组相比显著升高(P＜0.05);接受相同干预后,RNA干扰细胞的TNF-α、IL-8含量在各时间点都少于正常组(P＜0.05)。结论:小鼠患侵袭性肺曲菌病后肺组织中NOD2和RIP2 mRNA升高,RAW264.7细胞经MDP、曲菌孢子或MDP+曲菌孢子刺激后,其NOD2 mRNA和蛋白表达、RIP2 mRNA和蛋白表达、NF-κB表达、TNF-α、IL-8均显著升高,针对NOD2的RNA干扰可以明显抑制以上反应。提示NOD2在小鼠体内和小鼠RAW264.7细胞抗曲菌免疫反应中扮演重要角色,作用机制可能与RIP2依赖的NF-κB信号通道激活有关。