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第一部分探讨建立C57BL/6J小鼠黑色素瘤肺转移模型的影响因素【目的】探讨建立C57BL/6J小鼠黑色素瘤肺转移模型的影响因素,包括肿瘤的接种方式、细胞接种数量和成瘤周期。【方法】体外培养小鼠黑色素瘤细胞B16F10。1)取6-8周龄,雄性小鼠18只,随机分三组,每组6只,分别采取尾静脉注射、腹腔注射和皮下注射方式,每只小鼠注射100μL(3×10~6个细胞)B16F10细胞悬液,两周后,解剖小鼠并观察黑色素瘤的生长和转移情况;2)分3组,同上,经尾静脉分别注射3×10~6个细胞、1×10~6个细胞、3×10~5个细胞,两周后,解剖小鼠并观察黑色素瘤的生长和转移情况;3)分3组,同上,尾静脉注射1×10~6个细胞,分别于1周、2周、3周解剖小鼠,观察黑色素瘤的生长和转移情况。【结果】1)尾静脉注射小鼠黑色素瘤细胞,小鼠发生肺转移的成功率为100%,而腹腔注射和皮下注射,未发生肺转移。2)接种小鼠黑色素瘤细胞数量为1×10~6时,发生肺部转移的黑色素瘤细胞数量适中;接种细胞数量为3×10~6时,发生肺部转移的黑色素瘤细胞数量过多;接种细胞数量为3×10~5时,发生肺部转移的黑色素瘤细胞数量较少。3)尾静脉注射1×10~6个小鼠黑色素瘤细胞,饲养两周后,可以观察到黑色素瘤细胞明显的肺部转移,且不会导致小鼠死亡;饲养三周,黑色素瘤细胞肺部转移数量过多,且小鼠死亡过半;饲养一周,黑色素瘤细胞肺部转移数量较少。【结论】经尾静脉注射1×10~6个小鼠黑色素瘤细胞,生长两周时间,为构建C57BL/6J小鼠黑色素瘤肺转移模型的推荐方法。第二部分血小板膜糖蛋白GPIbα在肿瘤转移中的作用机制【目的】探讨血小板膜糖蛋白GPIbα在肿瘤转移中的作用机制。【方法】1)利用Real-time PCR技术检测肿瘤细胞株GPIbα基因的表达水平。2)利用Western Blot技术检测肿瘤细胞株GPIbα蛋白表达水平。3)GPIbα基因敲除小鼠黑色素瘤模型的构建。【结果】1)肿瘤细胞HCT116表达GPIbα基因和蛋白,但表达量相对于人血小板较低。2)GPIbα基因敲除小鼠,尾静脉注射B16F10细胞后,肺部肿瘤转移灶数量较野生型明显减少。【结论】血小板膜糖蛋白GPIbα促进黑色素瘤细胞在小鼠体内转移。