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目的:探讨survivin反义寡核苷酸对白血病细胞K562耐药性的影响。为临床肿瘤治疗提供实验依据。
方法:
1、转染survivin反义寡核苷酸对K562细胞survivin表达的影响。实验分四组:反义组、无义组、脂质体组、空白组。反义及无义寡核苷酸两端均有5个碱基硫代修饰,经阳离子脂质体介导的方式进行转染。转染48小时后用RT-PCR的方法检测survivin mRNA表达。
2、细胞耐药性的检测。Survivin反义寡核苷酸分别联合化疗药物阿霉素、柔红霉素共同作用于K562细胞。实验分四组:单用ADM组、单用DAM组、ADM+ASODN组、DAM+ASODN组。应用MTT法,根据对数剂量一概率单位回归法求回归方程和IC50.细胞耐药性以半数抑制浓度(IC50)表达。
3、survivin反义寡核苷酸联合阿霉素转染K562细胞,观察细胞内药物浓度的变化。实验分三组:空白组、单药组、联合组。survivin反义寡核苷酸分别与阿霉素,柔红霉素作用,MTT法测细胞内药物荧光强度的改变。
结果:
1、Survivin-mRNA在K562细胞中呈高表达,转染反义寡核苷酸后survivin-mRNA表达下调,而无义组及脂质体组无明显变化。反义组与无义组及脂质体组两两比较,P<0.05,有统计学意义。
2、在化疗药物研究联合应用survivin反义寡核苷酸共同作用K562细胞的实验中,ADM和AS0DN+ADM对K562细胞的IC50分别为0.54566和0.1879ug/ml,联合作用组对K562细胞的逆转倍数是单用ADM组的2.86倍。柔红霉素和ASODN+柔红霉素对K562细胞的IC50分别为0.5408和0.3686 ug/ml,联合作用组对K562细胞的逆转倍数是单用DAM组的1.467倍。 3、用MTT法测定ADM和ASODN+ADM时K562细胞内荧光强度分别为51.64、89.92。DAM和ASODN+DAM时K562细胞内荧光强度风别为63.71、88.47。两组比较P<0.05。
结论:Survivin反义寡核苷酸可下调survivin-mRNA表达;Survivin反义寡核苷酸与阿霉素和柔红霉素联合作用可提高K562细胞内药物浓度,降低K562细胞生存率,部分逆转耐药,为临床探索低耐药的肿瘤治疗提供实验依据。