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马尾松花粉是我国传统药食兼用的花粉品种,具有调节血脂、抗疲劳、抗氧化、免疫调节等功效,在国内外被广泛的应用于保健品、药品、饲料添加剂等领域[1]。植物甾醇(Phytosterol)具有良好的降胆固醇效果,在功能性食品和禽类生产中应用广泛,具有很高的食用和药用价值。本论文的主要研究内容如下:1.探索建立了适用于马尾松花粉中植物甾醇总含量快速检测的L-B比色法实验条件,以醋酐:冰醋酸:浓硫酸(6:3:1)为显色剂,采用冰醋酸溶解样品,取200μL样品溶液加入到5 mL显色液中,23℃水浴反应20 min,620 nm波长下进行检测。经优化的L-B比色法,显色剂配制简单,可储存较长时间,各种试剂的比例合适,反应温和,生成的络合物稳定时间较长,操作时间充足,适用于大批量样品中植物甾醇总含量的快速检测。2.破壁马尾松花粉不皂化物经三甲基硅烷(TMS)衍生化处理后,采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行定性分析,对比NIST08质谱库和文献离子碎片数据,解析鉴定出8种植物甾醇成分,分别为:Δ5-菜油甾醇(Δ5-Campesterol),豆甾醇(Stigmasterol),Δ7-菜油甾醇(Δ7-Campesterol),β-谷甾醇(β-Sitosterol),Δ5-燕麦甾醇(Δ5-Avenasterol),禾本甾醇(Gramisterol),环阿屯醇(Cycloartenol),24-亚甲基环木菠萝烷醇(24-Methylenecycloartanol)。首次对马尾松花粉中的植物甾醇成分进行了详细的定性分析。3.优化破壁马尾松花粉中植物甾醇的溶剂提取工艺,得到最佳提取条件为:正己烷做提取剂,料液比1:15,提取温度60℃,提取时间为30 min;并采用高速逆流色谱技术(HSCCC)和中压制备色谱技术(MPLC)相结合的方法进行分离纯化,得到了HPLC纯度为99.45%的植物甾醇成分,回收率达93.47%。方法简便,上样量大,回收率高,耗时少,重现性好,具有较高的分离制备效率。4.研究了在日粮中添加油菜花粉对鸡蛋中几种营养成分的影响,实验结果表明:在日粮中添加3%,5%和8%水平的花粉都不会对蛋黄中维生素A、维生素E和胆固醇水平产生显著影响。