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背景:白癜风是常见的皮肤色素脱失性疾病,其中非节段型白癜风与自身免疫异常密切相关。而CD8+T细胞介导的黑素细胞破坏是白癜风免疫发病机制的研究热点,研究表明白癜风的自身反应性T细胞是CD8+细胞毒性T细胞。第10号染色体同源缺失性磷酸酶张力蛋白基因（Phosphate and tension homology deleted on chromosometen,PTEN）,最早作为一种抑癌基因被发现,其编码的PTEN蛋白具有蛋白磷酸酶和脂质磷酸酶活性,可负调控PI3K-AKT-mTOR信号通路,影响多种细胞的生长、增殖、分化和转移,亦可参与免疫调节。多项研究揭示了 PTEN及下游通路对CD8+T细胞分化和功能具有调节作用。最近有学者对白癜风患者外周血CD8+T细胞进行了基因组学分析及蛋白验证,结果提示PTEN的下游蛋白PI3K表达异常。因此我们推测:白癜风中自身反应性CD8+T细胞的细胞毒活性失控可能与PTEN及其下游通路的调节失常有关。白癜风易诊难治,临床上缺乏安全有效的药物。近年来中医中药在免疫调节方面显示出一定的优势和应用前景。芹黄素是中草药“旱芹”的主要有效成分,研究表明其具有抗氧化、抗炎、抑制肿瘤生长、调节免疫等生物学作用,芹黄素可调节Th1/Th2细胞因子,促进自身免疫平衡,而白癜风患者存在细胞因子水平异常,因此我们探讨芹黄素是否对白瘢风的免疫异常有干预作用。目的:1.通过检测非节段型进展期白癜风患者外周血CD8+T细胞数量及PTEN蛋白的表达,进一步研究其与疾病严重程度的相关性,探讨PTEN在白癜风免疫发病机制中的作用。2.建立自身免疫性白癜风小鼠模型,通过动物模型探讨CD8+T细胞及PTEN在白癜风免疫发病机制中的作用。3.利用成功建立的白癜风小鼠模型,观察芹黄素的干预作用,即对自身免疫性白癜风小鼠外周血CD8+T细胞及相关细胞因子IFN-γ的影响,为中医药治疗白癜风提供新的思路和实验依据。方法:1.收集非节段型进展期白癜风患者12例,正常对照组10例,采用流式细胞术检测其外周血CD8+T细胞的数量及PTEN蛋白的表达,分析其与疾病严重程度的相关性。2.将12只雄性C57BL/6小鼠随机分为2组:正常对照组（Control）,白癜风造模组（Model）,每组6只。通过注射酪氨酸酶相关蛋白2肽（TRP2-180）、脂多糖（LPS）、胞嘧啶磷酸鸟苷寡核苷酸（CpGODN 1826）,对造模组小鼠后足垫和尾根部皮肤进行免疫接种,建立自身免疫性白癜风小鼠模型。采用HE染色观察鼠尾根部白斑组织病理变化,黑色素染色观察表皮黑色素变化。流式细胞术检测小鼠外周血CD8+T细胞数量及IFN-γ、PTEN的表达,Western blot法检测小鼠脾脏淋巴细胞PTEN蛋白的表达。3.采用随机对照方法将24只雄性C57BL/6小鼠分为4组:正常对照组（Control）、白癜风模型组（Model）、白癜风模型+芹黄素组（Model+APG）、白癜风模型+地塞米松组（Model+DEX阳性对照）,每组6只。免疫接种造模成功后,Model+APG组给予芹黄素灌胃,Model+DEX阳性对照组给予地塞米松灌胃,Model组给予生理盐水灌胃,Control组不予特殊处理。每天1次,时间为14天。药物干预后流式细胞术检测小鼠外周血CD8+T细胞IFN-γ的表达。ELISA法检测小鼠血清IFN-γ水平。结果:1.白癜风患者外周血CD8+T细胞的数量及PTEN蛋白的表达白癜风患者与正常对照组之间,外周血CD8+T细胞的数量无显著差异（P＞0.05）。与正常对照组相比,白癜风患者外周血CD3+CD8+T细胞中PTEN的表达显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.01）。检测白癜风进展期患者外周血PTEN在CD3+CD8+T细胞中的表达与VASI的相关性,结果显示两者之间无相关性。2.建立自身免疫性白癜风小鼠模型在第二次鼠尾根部免疫接种1周后,白癜风造模组小鼠尾根部皮肤出现白斑,白斑在伍德氏灯下呈亮蓝白色荧光。正常对照组小鼠皮肤颜色无变化。鼠尾白斑皮损处黑色素染色显示:正常对照组鼠尾根部表皮中黑素存在,分布均匀,白癜风模型组鼠尾白斑皮损处表皮黑素缺失。HE染色结果显示:正常对照组尾根部真皮浅层有少量单一核细胞,白癜风模型组真皮可见较多单一核细胞浸润。流式细胞术结果显示:白癜风模型小鼠与正常对照组之间,外周血CD8+T细胞的数量无明显差异（P＞0.05）,但外周血CD3+CD8+T细胞中IFN-γ的表达升高,差异具有统计学意义（P＜0.01）。3.PTEN在自身免疫白瘢风小鼠外周血CD8+T细胞及脾脏淋巴细胞中的表达流式细胞术结果显示:与正常对照组相比,自身免疫性癜风模型组小鼠外周血CD3+CD8+T细胞中PTEN的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。Western blot结果显示:PTEN在自身免疫型白癜风模型组小鼠脾脏淋巴细胞的表达与正常对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。4.芹黄素对自身免疫型白癜风小鼠外周血CD3+CD8+T细胞IFN-γ表达及血清IFN-γ的影响流式细胞术结果显示:芹黄素组及地塞米松组外周血CD3+CD8+IFN-γ+占CD3+CD8+T细胞的比例较白癜风模型组降低,差异有统计学意义（P＜0.01）,与正常对照组之间无显著差异（P＞0.05）。ELISA结果显示:与正常对照组相比,白癜风模型组小鼠外周血清IFN-γ明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）。芹黄素组、地塞米松组外周血清IFN-γ较白癜风模型组均降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,与正常对照组比均无显著差异（P＞0.05）。结论:1.非节段型进展期白癜风患者外周血CD8+T细胞中PTEN蛋白表达较正常人降低,提示白癜风中自身反应性CD8+T细胞的细胞毒活性失控可能与PTEN及其下游通路的调节失常有关。研究PTEN与CD8+T细胞的关系有可能进一步揭示白癜风自身免疫发病的机制。2.建立了自身免疫性白癜风小鼠模型,并发现小鼠外周血CD3+CD8+中IFN-γ及外周血清中IFN-γ表达升高。提示CD8+T细胞及IFN-γ与白癜风自身免疫发病相关。但PTEN在自身免疫白癜风小鼠外周血CD8+T细胞及脾脏淋巴细胞中的表达无明显变化,有待进一步研究。3.芹黄素可降低自身免疫性白癜风小鼠外周血CD3+CD8+T细胞IFN-γ及外周血清IFN-γ的表达水平。从细胞因子及免疫调节方面为芹黄素用于白癜风的治疗提供了新的思路和实验依据。