【摘 要】
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目的:构建纳米型三嵌段聚合物负载藻蓝蛋白PPP-PC并检测其生物安全性,探究PPPPC在AAPH诱导的氧化应激损伤模型中对人晶状体上皮细胞SRA01/04细胞的保护作用并初步探讨其机制。方法:(1)用均质机将三嵌段聚合物均质负载藻蓝蛋白并通过纳米粒度仪测定粒径、荧光光谱检测吸收峰、透射电镜观察形态;(2)不同浓度PPP-PC培养细胞后检测各组细胞增殖率;(3)建立AAPH诱导的人晶状体上皮细胞系S
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目的:构建纳米型三嵌段聚合物负载藻蓝蛋白PPP-PC并检测其生物安全性,探究PPPPC在AAPH诱导的氧化应激损伤模型中对人晶状体上皮细胞SRA01/04细胞的保护作用并初步探讨其机制。方法:(1)用均质机将三嵌段聚合物均质负载藻蓝蛋白并通过纳米粒度仪测定粒径、荧光光谱检测吸收峰、透射电镜观察形态;(2)不同浓度PPP-PC培养细胞后检测各组细胞增殖率;(3)建立AAPH诱导的人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞氧化应激损伤模型,实验分为正常对照组、AAPH损伤组、PPP-PC+AAPH干预组;分别进行相应干预后,(4)通过荧光显微镜比较各组细胞形态及活力;(5)应用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡比例;(6)应用蛋白免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达水平。结果:(1)PPP-PC粒径为100 nm左右且在670 nm左右出现吸收峰,透射电镜观察到藻蓝蛋白外层有三嵌段聚合物包裹;(2)不同PPP-PC浓度组的细胞增殖率与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);(3)荧光显微镜下显示PPP-PC+AAPH干预组细胞形态和活力与Control组相似,细胞密度较AAPH损伤组明显增加;(4)PPP-PC+AAPH干预组凋亡细胞比例为11.70%(10.63%～12.17%),比AAPH损伤组细胞凋亡比例32.35%(30.17%～33.42%)明显下降(P<0.05);(5)与AAPH损伤组相比,PPP-PC+AAPH处理组细胞Bcl-2表达增加而Bax表达减少,Caspase-3表达减少(P<0.05)。结论:纳米型PPP-PC进入人晶状体上皮细胞SRA01/04细胞后对细胞无毒性。PPP-PC具有抗氧化作用,能够抑制AAPH诱导SRA01/04细胞氧化应激损伤导致的细胞凋亡,其作用机制可能是通过调控线粒体依赖的凋亡途径。
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