非CO2依赖型细胞培养系统对膀胱癌T-24细胞增殖的影响

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目的探讨非CO2依赖型细胞培养系统对膀胱癌T-24细胞增殖的影响,非CO2依赖型细胞培养系统与CO2依赖型细胞培养系统有无区别。方法对膀胱癌T-24细胞采取非CO2依赖型细胞培养系统在(37℃、大气环境)培养箱(称为大气-B组)和(37℃、5%CO2)培养箱(称为CO2-B组)条件下,及CO2依赖型细胞培养系统在(37℃、大气环境)培养箱(称为大气-A组)和(37℃、5%CO2)培养箱(称为CO2-A组)条件下进行培养,检测分析两种体系培养基连续7天pH的比较;采用细胞增殖曲线及克隆形成实验检测细胞生长差异情况;采用流式细胞术检测分析两种系统对细胞周期及凋亡率影响的比较;并使用RT-PCR、Western blot技术检测分析两种系统下的膀胱癌细胞中survivin、caspase-3基因及蛋白的表达情况。结果1、pH值:非CO2依赖型细胞培养系统(37℃、大气环境)培养箱条件下培养基与CO2依赖型细胞培养系统(37℃、5%CO2)培养箱条件下培养基连续7天pH值稳定在7.4左右(P>0.05);而CO2依赖型细胞培养系统(37℃、大气环境)培养箱条件下培养基pH值在8.8左右,其高于CO2依赖型细胞培养系统(37℃、5%CO2)培养箱条件下培养基pH值(P<0.05)。2、细胞克隆数:大气-B组细胞克隆数(324±11)与CO2-A组(320±15)细胞克隆数基本相同(P>0.05);而大气-A组细胞克隆数(66±6)比CO2-A组细胞克隆数减少(P<0.05)。3、细胞生长增殖曲线:大气-B组与CO2-A组细胞生长增殖趋势基本一致(P>0.05);而大气-A组比CO2-A组细胞生长增殖下降(P<0.05)。4、细胞凋亡率:细胞在大气-B组与CO2-A组条件下培养,随着作用时间的延长细胞凋亡数增加,凋亡率相比无明显变化(P>0.05);而在大气-A组条件下比CO2-A组条件下细胞凋亡数增加(P<0.05)。5、RT-PCR及Western blot:细胞在大气-B组与CO2-A组条件下培养,表达survivin、caspase-3因子及蛋白无明显变化(P>0.05);而在大气-A组条件下随着培养时间的延长,caspase-3因子及蛋白表达增高, survivin mRNA的表达并未明显变化,比CO2-A组条件下条件下表达上调(P<0.05)。结论膀胱癌非CO2依赖型细胞培养系统对细胞增殖、基因表达等方面与膀胱癌CO2依赖型细胞培养系统无明显区别。
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