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复方口服避孕药(combined oral contraceptive, COC)是一种简便、高效的避孕节育方法,在全球应用广泛,据估计目前全世界有将近一亿的育龄妇女青睐选择COC进行避孕。除确切的避孕效果之外,COC还具有许多其他方面的健康益处：可以预防贫血、异位妊娠、骨质疏松症,治疗功能失调性子宫出血、改善多囊卵巢综合症及高雄激素水平过高症状、缓解子宫内膜异位症、治疗子宫内膜增生及息肉等。然而人们更加关注的是COC可能产生的严重不良反应的风险：如升高血压、增加心肌梗塞、静脉血栓栓塞及脑卒中等心血管疾病的发病风险等。脑卒中作为COC的一种罕见且严重的不良反应,一直为研究者所关注。在不用人群中所开展的COC与脑卒中发病风险的关联研究所得到的结果不尽相同,就算是同样使用COC的妇女也仅有一小部分发生脑卒中,这些都提示着特殊的遗传因素能够影响脑卒中的易感性。肾素-血管紧张素-醛固酮通路(renin angiotensin aldosterone system, RAAS)因其维持血管功能、调节动脉血压等方面的重要作用成为脑卒中分子遗传学研究的重要候选基因通路。同时COC中的雌激素可以激活RAAS通路,如升高AGT、AGTR1的表达水平,进而影响心血管疾病的发生。因此,RAAS通路很有可能是介导雌激素与脑卒中发病增加的重要机制之一。研究发现MicroRNA (miRNA)在调控RAAS通路相关基因的表达方面起着着重要的作用,miRNA通过与靶mRNAs的3’UTRs(非翻译区)不完全互补配对,从而抑制翻译或加速mRNA的退化降解。而靶基因miRNA结合区的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNP)位点能够影响miRNA与靶区域的结合效率,引起miRNA调控作用发生变化,可能会诱导相应的表型-疾病状态。RAAS通路AGTR1基因上的rs5186位点的基因突变使其与miR-155的结合效能发生改变,导致AGTRl的表达异常,进而影响高血压的发生。但目前尚无RAAS通路miRNA结合区多态性位点与女性脑卒中关联研究的报道。本研究以COC暴露及RAAS通路基因miRNA结合区域位点多态为切入点,采用生物信息学技术,筛选RAAS通路基因miRNA结合区域的SNP位点,并探讨这些多态位点与中国女性脑卒中发病风险的关联,以期找出中国女性人群脑卒中遗传易感性标志物。并进一步分析遗传因素之间、遗传因素与环境因素之间的联合作用对脑卒中发病风险的影响。研究结果对于完善脑卒中防治策略、指导安全避孕、促进女性健康具有重要意义。[目的]本研究旨在系统探讨COC暴露、RAAS通路基因miRNAs结合位点多态与中国女性脑卒中发病风险的关系,并在此基础上进一步分析阳性位点间、COC暴露与阳性位点间的联合作用对脑卒中发病风险的影响。[方法]在中国女性避孕药具使用队列研究的基础上,采用病例-对照研究设计,收集队列中确诊的脑卒中新发病例共453例,并按年龄、地区匹配919例对照,收集研究对象的避孕史(COC暴露情况)、个人疾病史、生育史等流行病学资料,并采集空腹静脉血。利用miRNA靶基因多态性位点预测软件及SNP数据库,筛选出RAAS通路基因miRNAs结合区域的多态性位点(AGTRl rs5186、AGTR2rs5194、NR3C2rs5534、AGT rs7079、AVPR1A rs11174811),采用TaqMan探针技术对筛选出的位点进行检测分型。[结果]1. COC暴露、高血压等影响因素与女性脑卒中发病风险的关联1.1COC暴露与脑卒中发病风险的关联COC使用者发生脑卒中的风险是未使用者的1.31倍(OR=1.31,95%CI：1.01-1.71),发生出血型脑卒中的风险是未使用者的1.83倍(OR=1.83,95%CI：1.25-2.66),且脑卒中的发病风险随着COC累积使用时间的延长而增加,趋势性检验P<0.001。COC累积使用时间达到20年的女性发生出血型脑卒中及梗塞型脑卒中的风险是未使用者的2.89倍及1.95倍。1.2脑卒中影响因素的单因素logistic回归分析高血压可以显著升高女性脑卒中的发病风险(OR=12.18,95%CI：8.85-16.78),其中出血型脑卒中的发病风险增加6.90倍(OR=7.90,95%CI：5.12-12.18),梗塞型脑卒中的发病风险增加15.80倍(OR=16.80,95%CI：10.84-26.05)；高脂血症可以使脑卒中的发病风险则略有增加(OR=1.70,95%CI：1.35-2.16),其中梗塞型脑卒中的风险增加0.97倍(OR=1.97,95%CI：1.48-2.63),但并不升高出血型脑卒中的发病风险。2.RAAS通路基因miRNA结合区SNPs与脑卒中发病风险的关联2.1SNPs与脑卒中发病风险的关联调整年龄、地区、高血压、高脂血症等因素后,miR-155的靶基因AGTR1上的rs5186位点的多态性改变与出血型脑卒中的发生成正关联,miR-539/miR-584的靶基因AGT上的rs7079位点的多态性改变与梗塞型脑卒中的发生成负关联。与野生型rs5186AA基因型相比,杂合型rs5186AC及AC/CC基因型均可以增加出血型脑卒中的发病风险(OR=1.83,95%CI:1.10-2.97；OR=1.74,95%CI:1.06-2.87)；与野生型rs7079CC基因型相比,杂合型CA及CA/AA基因型可以降低梗塞型脑卒中的发病风险(OR=0.62,95%CI:0.43-0.90；OR=0.58,95%CI:0.56-0.85)。2.2RAAS通路基因miRNA结合区位点多态与脑卒中发病风险的分层分析对rs5186位点的基因型与出血型及梗塞型脑卒中的发病风险进行了分层分析,发现在年龄≥55岁及BMI<24的人群中,携带rs5186AC/CC基因型可以升高出血型脑卒中的发病风险(OR=1.93,95%CI：1.02-3.646；OR=1.88,95%CI：1.01-3.52)；BMI<24的女性携带rs5186AC/CC基因型可以升高梗塞型脑卒中的发病风险(OR=1.94,95%CI：1.11-3.38)。对rs7079位点的基因型与出血型及梗塞型脑卒中的发病风险进行了分层分析,在年龄≥55岁、患有高血压或高脂血症的人群中,携带AGT基因的rs7079CA/AA基因型可以显著降低塞型脑卒中的发病风险(OR=0.54,95%CI：0.35-0.83；OR=0.62,95%CI：0.42-0.91；OR=0.60,95%CI：0.38-0.93)。3.联合作用分析3.1rs5186位点和rs7079位点的联合作用与脑卒中发病风险的关联rs5186位点和rs7079位点风险等位基因的联合作用可以升高女性脑卒中的发病风险(趋势性检验P=0.0037),随着携带风险等位基因个数的增加,脑卒中的发病风险呈现升高趋势,尤其是梗塞型脑卒中的发病风险。3.2COC暴露和基因多态性的联合作用与脑卒中发病风险的关联与携带rs5186AA基因型且不使用COC的个体相比,携带rs5186AA基因型且使用COC的女性发生出血型脑卒中的风险增加0.71倍(OR=1.71,95%CI：1.18-2.48),而使用COC同时携带rs5186AC/CC基因型的女性发生出血型脑卒中的风险增加1.81倍(OR=2.81,95%CI：1.45-5.64)。[结论]COC暴露、高血压、高脂血症是中国女性脑卒中的重要危险因素；miR-155的靶基因AGTR1上的rs5186位点的多态性改变升高出血型脑卒中发病风险,miR-584的靶基因AGT上的rs7079位点的多态性改变降低梗塞型脑卒中的发病风险；rs5186位点与rs7079位点风险等位基因的联合作用可以增加女性脑卒中的发病风险；COC暴露与rs5186AC/CC基因型的联合作用可以升高出血型脑卒中的发病风险。