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淋巴瘤(lymphoma)约占全球所有肿瘤的3-4%,是排名第七位的常见肿瘤,是淋巴造血系统的恶性肿瘤。淋巴瘤可分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma,HL)和非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’slymphoma,NHL)两大类。在中国,非霍奇金淋巴瘤的发病率以每年5%的速度增长,而全球的非霍奇金淋巴瘤的死亡率超过50%。p53是一个肿瘤抑制基因,它的突变与大部分淋巴瘤的发生密切相关。随着对淋巴瘤生物学特征的不断研究,分子靶向药物的应用可以有效提高患者的5年生存率。即使如此,淋巴瘤的5年生存率也只有40%。因此,寻找新的分子靶标,研究其在淋巴瘤中的机制具有至关重要的意义。长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)是长度在200个核苷酸及以上,不能编码蛋白质的RNA,碱基组成从200 nt到10万nt不等。超保守RNA(ultraconserved RNA)是LncRNAs的一种亚类,因其序列在人、大鼠和小鼠中百分之百相同,故被称为超保守RNA。uc.133是超保守RNA的一种,总长度为277核苷酸,其生物学作用尚未有任何报道。RSRC1(Arginine(R)/serine(S)-richcoiled-coil 1)是一种新发现的雌激素受体(ER)共调节因子,它在人的第三号染色体q25上,总共编码334个氨基酸。RSRC1含有9个内含子,而uc.133位于RSRC1第4内含子中。根据文献报道,RSRC1能够促进乳腺癌细胞如MCF-7、BT474的生长,但是其在淋巴瘤中的作用及其机制尚未有报道。基于我们前期研究,p53可能可以直接调控某些超保守RNA。本项目旨在阐明:1)超保守RNA uc.133及其宿主基因RSRC1与p53的关系;2)超保守RNA uc.133及其宿主基因RSRC1在淋巴瘤中的表达谱;3)uc.133及其宿主基因RSRC1在淋巴瘤中的功能;4)uc.133及其宿主基因RSRC1在淋巴瘤中可能的作用机制。首先,我们研究了超保守RNA uc.133及其宿主基因RSRC1与p53的关系。取p53ER敲入(knock-in)小鼠新分离的骨髓细胞与可以分泌肿瘤基因Myc逆转录病毒的病毒包装细胞E86(E86-Myc)混合,然后将混合的细胞一起注射到小鼠背部皮下,四个星期后,小鼠背部生长出1cm3的肿瘤,经病理组织学及流式细胞仪检测,证明所有肿瘤均为B细胞性淋巴瘤。在这个小鼠体内淋巴瘤模型中,由于p53与雌激素受体基因是融合在一起的,因此注射雌激素模拟物他莫昔芬(tamoxifen)可以使p53ER融合蛋白从细胞浆进入细胞核,从而激活p53的功能,这样我们就成功建立了 p53可控表达的淋巴瘤小鼠模型。然后将荷瘤小鼠进行分组,给小鼠腹腔注射他莫昔芬,取在不同时间段(Omin、19min、20min、30min、60min)肿瘤组织,利用荧光定量PCR,检测uc.133及RSRC1的表达。结果显示,p53激活后,30min内uc.133和RSRC1的表达水平就发生显著变化,因此我们猜测,p53可以直接调控uc.133和RSRC1的表达。我们拟进一步使用抗p53抗体进行组蛋白免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验及启动子荧光素酶报告实验验证p53是否结合在uc.133的上游DNA序列上还是RSRC1基因的启动子上。其次,我们检测了超保守RNA uc.133及其宿主基因RSRC1在淋巴瘤中的表达谱。利用实时荧光定量PCR,分别比较了小鼠正常B细胞与小鼠B淋巴瘤细胞,以及15例人的反应性增生与15例人的弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)临床样本中uc.133与RSRC1的表达水平,发现uc.133在小鼠淋巴瘤组织中低表达约100倍,在人的淋巴瘤组织中低表达7倍,而作为宿主基因的RSRC1在小鼠淋巴瘤组织中表达升高2.5倍,在人的淋巴瘤组织中表达升高至6倍。说明uc.133及其宿主基因RSRC1在恶性B细胞性肿瘤中的表达具有显著差异性。第三,我们研究了 uc.133及其宿主基因RSRC1对淋巴瘤细胞生长的影响。首先构建了 uc.133的逆转录病毒及RSRC1的慢病毒载体,用病毒感染淋巴瘤细胞,使uc.133及其宿主基因RSRC1在小鼠淋巴瘤细胞38B9和人淋巴瘤细胞Romas中过表达,检测过表达后淋巴瘤细胞的生长及凋亡等指标,发现uc.133可以明显抑制38B9和Romas淋巴瘤细胞的生长,而RSRC1的作用与uc.133相反,可以促进38B9和Romas淋巴瘤细胞的生长。Annexin V染色后流式细胞仪检测,发现过表达uc.133后,早期凋亡的淋巴瘤细胞增加,而过表达RSRC1早期凋亡淋巴瘤细胞下降。说明uc.133与RSRC1在淋巴瘤中的过度表达可以影响B细胞淋巴瘤的生长,但作用相反。最后,我们研究了 uc.133及其宿主基因RSRC1在淋巴瘤中可能的作用机制。在B淋巴瘤细胞中过表达uc.133,48小时后提取RNA,利用荧光定量PCR及Western Blot检测RSRC1的表达水平,发现过表达uc.133后,RSRC1表达降低,降低13倍。同样,在B淋巴瘤细胞中过表达RSRC1后,48小时时荧光定量PCR检测uc.133的表达水平,结果显示,uc.133表达水平基本不变。说明uc.133的抑癌作用可能是通过抑制其宿主基因RSRC1的表达来实行的,而RSRC1的促癌作用可能是通过其它机制来实现的。我们将继续研究uc.133及其宿主基因RSRC1相互作用机制,寻找潜在的新分子靶标,为临床分子靶向治疗提供理论依据。