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目的：应用基因重组技术获敏感性、特异性高的弓形虫速殖子主要表面抗原P22的融合蛋白，应用于弓形虫感染免疫学诊断。 方法：采用PCR方法，以弓形虫RH株DNA为模板，扩增编码主要表面抗原P22的基因片段。将该基因片段插入T／A克隆，经PCR、双酶切和测序鉴定，获阳性克隆加以扩增，试剂盒抽提阳性克隆。双酶切后纯化目的片段，再将其与原核表达载体pET-32a按一定比例在T4连接酶的作用下重组。用PCR结合双酶切的方法鉴定，核酸测序验证。将构建好的原核表达载体pET-32a／P22转入表达菌株BL21中，用一定浓度的IPTG诱导表达，SDS-PAGE观察表达效果，Western blot对融合蛋白进行鉴定。将重组菌表达产物溶于尿素中，通过亲和层析的方法得到P22蛋白，以分步洗涤和透析等方法逐步洗脱尿素，纯化产物经氧化／还原型谷胱苷肽复性后即为重组蛋白。以该蛋白作抗原，与弓形虫粗抗原比较检测弓形虫感染兔血清和其他各种疾病患者血清。 结果：1．获一条基因片段，经测序确认为P22的编码基因。2．成功构建重组基因pET-32a／P22。3．获重组抗原P22。4．重组抗原 南京医科大学硕卜学位论文P22有高度的敏感性和特异性:弓形虫感染兔的检出率高达%.7%而与其他非弓形虫感染动物、人无交又反应。 结论:成功获得重组抗原P22，以此作抗原检测弓形虫抗体，证明具有高度的敏感性和特异性。