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目的:了解联合应用猪重组endoglin DNA疫苗(ppEDG)和蛋白疫苗(pEDG)的抑瘤效果是否优于单独应用DNA或蛋白疫苗的疗效,并初步探讨其抗血管形成机制。方法:使用酶切反应和琼脂糖凝胶电泳初步了解猪重组endoglin真核表达质粒的结构和分子大小,鉴定猪重组endoglin质粒DNA是否有效表达于真核细胞COS-1。然后,在小鼠右腋皮下接种CT26肿瘤细胞,建立肿瘤模型。将重组endoglin蛋白和真核表达endoglin质粒DNA配制成疫苗,皮下或肌肉注射于荷瘤小鼠。抗肿瘤疗效观察实验中,将荷瘤小鼠分为四组,即非免疫治疗组(记作NS)、单独注射DNA疫苗组(DNA vaccine,记作DV)、单独注射蛋白疫苗组(protein vaccine,记作PV)以及DNA和蛋白疫苗联合治疗组(combinational vaccine,记作CV)。测量肿瘤大小,并用公式计算体积(体积=0.52×长×宽2)。记录小鼠生存时间。用抗CD31抗体进行免疫组织化学检测免疫小鼠肿瘤血管的微血管密度(microvessel density,MVD)。另外,为了观察治疗的副作用,使用同等数量小鼠并按上述方法进行分组,只注射疫苗不接种肿瘤,免疫四次两周后部分处死,取血或脾等标本,其余小鼠继续观察7周,注意毛色、食欲、体重、活动情况的变化,并取血检测血常规、肌苷、谷丙转氨酶(GOT)和谷草转氨酶(GPT)等指标,了解肝肾功能状态。然后利用Western blot、ELISPOT assay和ELISA的方法,检测疫苗诱导的抗体产生情况。51Cr释放法用来检测CTL的功能,探讨和研究DNA疫苗和蛋白疫苗抗肿瘤的免疫机制。结果:1.本研究所采用的猪重组真核表达endoglin DNA质粒酶切反应产物大小与预测一致,并且该重组质粒能在COS-1细胞中有效表达,所表达的重组endoglin蛋白分子量大小和预测相一致。2.在抗肿瘤疗效观察实验中,用CV治疗荷瘤小鼠,肿瘤生长减慢,生存时间明显延长。抗CD31抗体免疫组织化学结果显示,CV免疫小鼠肿瘤组织中微血管计数明显减少。3.研究过程中未发现各组有明显的毒副作用。4.在抗肿瘤机理研究中,Western blot和ELISA检测都发现,小鼠免疫血清中,CV组抗endoglin抗体产生滴度大于其它治疗组,结果有显著性差异。ELISPOT技术检测也发现CV组免疫小鼠的脾脏中含有较多特异性的分泌抗小鼠自身endoglin抗体的B淋巴细胞。51Cr释放法实验中,发现PV免疫的小鼠脾脏细胞没有杀伤脐血静脉内皮细胞和肿瘤细胞的能力,而DV组和CV组的脾脏细胞具有相似的特异性杀伤静脉内皮细胞的能力,