猪急性腹泻综合征冠状病毒（SADS-Co V）作为一种新近发现的猪肠道冠状病毒,能够引起严重的猪急性腹泻综合征（SADS）。临床突出表现为新生仔猪急性消化道症状,死亡率高达90%以上。该病毒与其它冠状病毒一样具有四种主要的结构蛋白（S、M、E、N）,其中M蛋白具备多重生物学意义,是重要的结构蛋白,然而目前关于SADS-Co V-M蛋白生物学特性及相关研究的文章却鲜有报道。基于此,为明确SADS-Co V-M蛋白的生物学功能,本研究运用生物信息学方法对SADS-Co V-GDLS-2017株M蛋白进行了系统分析。结果显示,SADS-Co V-M蛋白氨基酸突变较少,保守性高,且稳定亲水,含3个潜在的N-糖基化位点和长跨膜区域,平均抗原指数高达0.6268,具有7个抗原表位。二级结构中利于抗体嵌合的β-转角、无规则卷曲结构占比达44.73%,三级结构突出表位作图中共产生8个线性表位,5个不连续表位,得分均在0.8以上,且能稳定的结合TLR-3。结果表明M蛋白在SADS-Co V疫苗研发、抗病毒药物设计与检测方法建立上是良好的候选蛋白。为进一步对SADS-Co V-M蛋白进行相关研究,本试验对SADS-Co V-M蛋白进行了原核表达,并对表达的重组M蛋白进行SDS-PAGE分析、切胶纯化、浓度测定和Western blot鉴定。结果显示,重组后的M蛋白以包涵体形式表达为主,切胶纯化后条带单一,浓度和纯度较高,并能特异性的与His标签的山羊抗小鼠一抗发生反应,在目的条带26 KDa处出现条带。结果表明本试验成功表达了重组SADS-Co V-M蛋白。试验以纯化的重组SADS-Co V-M蛋白为免疫原,通过杂交瘤技术制备得到2株能特异性稳定分泌抗SADS-Co V-M蛋白的单克隆抗体,分别命名为62F7和62E8。抗体染色体、效价和亚类鉴定结果显示,其染色体数量为103、104条,效价均高于1:12800,重链亚型均为Ig G2b,轻链均为κ链。Western blot鉴定结果显示,其均不与PEDV反应,只与重组的SADS-Co V-M蛋白发生免疫反应。IFA鉴定结果显示,62F7、62E8均与SADS-Co V毒株产生特异性反应。综上,本研究成功对SADS-Co V-M蛋白进行了生物信息学分析和原核表达。通过杂交瘤技术成功制备了两株免疫原性及特异性良好的SADS-Co V-M蛋白单克隆抗体,为SADS-Co V疫苗研发、抗病毒药物设计与检测方法建立提供了物质基础。