粘着斑激酶的原核表达、纯化及抗体的制备

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粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)是细胞质内单亚基非受体型酪氨酸激酶,通过各种信号途径参与调节细胞生长、发育、黏附、细胞骨架重组、转化、扩散和迁移等过程。一采用PCR方法,从Flag-FAK质粒中克隆编码FAK C端273个氨基酸的基因片段,构建FAK融合蛋白原核表达载体PET28a(+)/FAK,进行原核表达与蛋白纯化,取纯化的FAK蛋白免疫小鼠,制备FAK抗血清。结果表明构建了表达FAK c端功能结构域的原核表达质粒PET28a(+)/IYAK,经过BL21(DE3)大肠杆菌表达、镍亲和层析柱纯化,获得分子量约33 kDa的融合蛋白。EL ISA检测显示该蛋白有较高效价。荧光免疫结果显示此多克隆抗体与FAK蛋白特异性结合,为进一步研究神经细胞中FAK的作用机制及奠定了基础。
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