研究目的：　　干扰素调节因子7（Interferon regulatory factor7，IRF7）是诱导I型干扰素表达的最主要的转录因子，寻找IRF7新的剪接异构体，研究其结构及功能，为探索IRF7参与调控I型干扰素机制的多样性提供基础。　　实验方法：　　1、DNA提取、RNA提取与1st Strand cDNA的合成　　提取293T细胞总DNA作为I型干扰素IFNα和IFNβ启动子扩增的模板，并提取Ploy(I:C)刺激后的293T细胞总RNA，逆转录合成1st Strand cDNA，作为后续PCR扩增的模板。　　2、聚合酶链式反应（PCR）与Sanger测序　　根据IRF7-a和IRF7-d开放阅读框（Open Reading Frame，ORF）的核苷酸序列设计引物进行PCR扩增，产物克隆到PMD-19T载体，随机挑取100个阳性克隆进行Sanger测序，经序列比对，保留含IRF7新剪接异构体的克隆，提取质粒PMD-IRF7作为构建表达载体的模板。　　3、cDNA末端快速克隆（Rapid-amplification of cDNA ends，RACE）　　通过 cDNA末端快速克隆获取IRF7新剪接形式的完整转录本并克隆到PMD-19T载体中，Sanger测序确定其转录起始位点和终止位点。　　4、表达载体pCDNA3.1-His/A-IRF7-e与报告基因载体pGL3-IFNα/β的构建　　以Sanger测序结果确定为IRF7新的剪接形式的质粒（PMD-IRF7）为模板，扩增IRF7新剪接异构体的表达序列，并克隆至pCDNA3.1-His/A载体。以提取的293T细胞总DNA为模板构建报告基因载体pGL3-IFNα/β。　　5、双荧光素酶报告分析检测　　转染表达载体、报告基因载体以及作为内参的pRL-TK质粒至293T细胞，荧光素酶检测试剂盒（Dual-Glo luciferase assay system）检测，求出萤火虫荧光素酶/海肾荧光素酶数据比值，其平均数即为对应荧光素酶活性数值。至少做三次独立的生物学重复。　　结果：　　一、IRF7-e的克隆以及生物信息学分析　　以IRF7-a-F/IRF7-a-R和IRF7-d-F/IRF7-d-R为引物进行PCR扩增后得到的序列，克隆至PMD-19T载体，测序后生物信息学分析发现了IRF7的一种新的剪接形式，命名为IRF7-e（GenBank：KC477210）。IRF7-e全长为1994 bp，包含长为410 bp的5’非编码区（Untranslated region，UTR）和120 bp的3’非编码区，并在3’非编码区包含有保守的PloyA信号序列AATAAA。IRF7-e的开放阅读框为1464 bp，编码487个氨基酸，预测其等电点为6.659，蛋白分子量为52.8 kDa。IRF7的五种剪接形式都含有一个保守的DNA结合结构域（DNA-binding domain， DBD），其中IRF7-e和IRF7-b的蛋白质序列相似度（Identity）最高，达到96%，与IRF7-d、IRF7-a和IRF7-c相似度分别为94%、90%、31%。IRF7-e基因组由8个外显子和7个内含子组成，其基因组结构与IRF7-d最为相似；与IRF7-d相比较，IRF7-e缺少第5个外显子。　　二、IRF7-e对I型干扰素基因IFNα和IFNβ启动子激活的分析　　双荧光素酶报告分析结果发现过表达IRF7-e可以显著提高IFNα和IFNβ启动子的活性，其中对IFNα启动子活性提高了12.18倍；对IFNβ的启动子活性提高了2.99倍，与对照组相比都具有显著性差异（P<0.01）。　　结论：　　1、本文发现了IRF7一种新的剪接异构体形式，即IRF7-e，并通过RACE获取RF7-e基因全长。　　2、双萤光素酶报告实验分析发现，过表达IRF7-e可以显著地提高I型干扰素基因IFNα和IFNβ启动子的活性。由此可知，IRF7-e可能参与I型干扰素的调控。IRF7-e的发现为探索IRF7参与调控I型干扰素机制的多样性提供了基础。　　3、IRF7-e的发现有助于进一步揭示其对于系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus，SLE）发生、发展所起的重要作用，也为该自身免疫病的临床治疗提供一个可能的切入点。